中草药猫眼草提取物诱导人胃癌sgc-7901细胞凋亡的研究

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1、延安大学学位论文中草药猫眼草提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究专业名称：内科学作者姓名：王亚萍指导教师：惠起源分类号：R735.2单位代码：10719学号：12147027密级：论文题目：中草药猫眼草提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究论文作者：王亚萍指导教师、职称：惠起源教授学科、专业名称：内科学提交论文日期：二○一五年六月创新性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢中所罗列的内容以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果；也不包含为获得延安大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

2、与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。本人签名：日期：关于论文使用授权的说明本人完全了解延安大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属延安大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为延安大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许查阅和借阅论文；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。（保密的论文在解密后遵守此规定）本学位论文属于保密在年解密后适用本授权书。本人签名：日期：导师签名：日期：中英文对照

3、缩略词表英文缩写英文全称中文名称MTTmethylthiazolyltertrazolium四甲基偶氮唑蓝ODopticalsulphoxide吸光度GAgeldanamycin格尔德霉素FCMflowcytometry流式细胞仪PIPropidiumIodide碘化丙啶FBCFetalbovineserum胎牛血清SPSSStatisticalProgramforSocialScience社会科学统计程序DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液TritonX-100OctylPhenoxyPolyEthoxy聚乙二

4、醇单辛基苯基醚中草药猫眼草提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究内科研究生王亚萍指导老师惠起源教授摘要目的观察猫眼草提取物在体外诱导人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用；探讨猫眼草诱导人胃癌SGC-7901细胞细胞凋亡的能力，并分析其可能发生的作用机制。方法采用体外培养技术，以不同浓度猫眼草（0.2g/L,0.4g/L,0.8g/L,1.6g/L,3.2g/L）作用于人胃癌SGC-7901细胞，用MTT比色法检测不同浓度的猫眼草对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响；荧光显微镜下观察SGC-7901细胞凋亡形态变化；应用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的细胞凋亡率及凋亡周期变化；

5、通过免疫组化法检测胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果1、MTT法测定不同浓度猫眼草的对胃癌细胞SGC-7901作用24h、48h、72h均有明显的抑制作用，与对照组相比有显著的差异性（P<0.05），且随着作用时间的延长，其产生的抑制作用越明显，表现出时间及剂量依赖性。2、相差显微镜下观察不同浓度的猫眼草处理的SGC-7901细胞后与对照组相比，实验组细胞形态发生了明显的变化，生长缓慢，其贴壁状态差，细胞边缘不整、出现皱缩、变圆，形态变差，失去了正常细胞形态。3、荧光显微镜下观察不同浓度的猫眼草处理的SGC-7901细胞后，与对照组相比实验组细胞较对照组细胞生长缓慢较稀

6、疏，细胞体积变圆、变小，细胞核出现固缩，细胞质浓缩；折光性变强，呈现不规则形状，呈致密强荧光，DNA浓缩并向核膜靠拢，有少量凋亡小体形成4、流式细胞仪细胞周期分析显示，细胞经猫眼草处理后，在G1和S期细胞数比率减少，而在G2/M期细胞数比率增加，猫眼草可能通过阻断胃癌SGC-7901细胞在G2/M期，诱导SGC-7901细胞凋亡，且细胞周期阻滞效应和凋亡率均呈剂量依赖性。5、细胞免疫组化结果表明，SGC-7901细胞胞浆内有Bcl-2表达，棕黄色颗粒较多，强阳性细胞较多，棕黄色颗粒增多，大部分表达较强，随着猫眼草浓度的加大，SGC-7901细胞表达Bcl-2蛋白随着时间、剂量的增加而阳性表达

7、率明显降低，着色变淡，强阳性染色的比例减少，棕黄色不表达或较弱表达。结论1．MTT结果显示，在一定范围内猫眼草可明显抑制胃癌SGC-7901细胞的生长增殖，与对照组相比均有显著的差异性（P<0.05），并随着剂量的增加和时间的延长，凋亡率越发明显。2.通过倒置相差显微镜和荧光显微镜的观察，镜下见细胞形态发生明显变化，可清楚的看到凋亡小体，证实了猫眼草提取物可诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡。3.流式细胞