lutein对胃癌sgc-7901细胞的作用及分子机制研究

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1、郑州大学硕士学位论文Lutein对胃癌SGC--7901细胞的作用及分子机制研究姓名：冀波申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：付蕾；王明臣201205摘要摘要背景与目的：胃癌在我国的发病率居全国首位，是一种常见的恶性肿瘤之一。传统的治疗手段主要有手术治疗、放射治疗、化学治疗以及免疫治疗等，这些治疗手段虽然在一定程度上延长了胃癌患者的寿命，但是对于胃癌病人的治愈率仍需进一步提高。叶黄素(Lutein)是一种天然的含氧类胡萝卜素，主要存在于蔬菜、水果等膳食中，医学实验证明植物来源的Lutein是一种高性能的抗氧化剂，在预防黄斑变性、心血管疾病、白内障以及肿瘤的发生发展等方

2、面有着重要的作用。但利用其抗氧化特性对肿瘤进行进一步的治疗很少见报道。本实验旨在研究Lutein对活性氧和胃癌SGC．7901细胞凋亡的影响以及进一步探讨其分子机制。方法：Lutein对胃癌SGC．7901细胞的增殖抑制效应及其凋亡机制，采用SRB法绘制SGC．7901细胞8d内的生长曲线；SRB法检测不同浓度Lutein对SGC．7901细胞增殖的影响；倒置显微镜下观察SGC．7901细胞经过药物作用后的形态学变化：Hoecllst33342／PI荧光染色法观察Lutein对胃癌SGE．7901细胞的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。荧光分析法检测Lutein作用SOC．7

3、901细胞后，细胞内ROS的变化；采用GSH和生色底物DTNB反应产生黄色的TNB和GSSG的颜色反应检测Lutein作用SG-C．7901细胞后细胞内总谷胱甘肽含量的变化；RT-PCR法检测细胞内SOD．2n承NA、IKB．ttmRNA和NF．r,BP65删RNA的表达情况；Western-blot检测细胞内Ⅱ①．a、NF．r．BP65以及Bcl．X1蛋白的表达情况。结果lSRB法检测结果显示，Lutein呈时间剂量依赖性的抑制胃癌SGC．7901细胞的增殖，其中40mg·Ld的Lutein作用SGC．7901细胞24h、48h、72h的抑制率分别是8．570／硅2．4

4、3％、25．070／硅2．90％和32．330／挂1．81％：160mg·Lq的Lutein作用SGC．7901细胞的抑制率分别上升为34．720／硅4．06％、64．55e／硅2．48％和83．290／硅0．10％。Hoechst33342／PI荧光染色法检测细胞的凋亡情况，对照组显示低蓝光低红光，40mg·Lq部分显示高蓝光低红光，80mg·L．1大部分显示高蓝光低红光，160mg·L以大部分显示低蓝光高红光；荧光分光光度计检测Lutein作用胃癌SGC．7901细胞后细胞内ROS的变化，结果显示，随着Lutein浓度的升高，细胞内ROS的含量显著降低(P<0．01)

5、；采用GSH和生色底物DTNB反应的颜色反应检测Lutein作用胃癌SGC．7901细胞后细胞内总谷胱甘肽含量发摘要生变化，结果显示，随着Lutein浓度的升高，细胞内总谷胱甘肽的含量明显增加(P

6、而增强，NF．r,BP65蛋白的表达随药物浓度的增大而有所抑制，抗凋亡蛋白Bcl．X1的表达随药物浓度的增大明显下调。结论：Lutein对胃癌SGC．7901细胞的生长抑制以及诱导其凋亡的分子机制，是通过降低细胞内ROS的含量，适当增加细胞内总谷胱甘肽的含量，提高SOD．2mRNA的表达所介导的。同时抑制NF．rd3信号转导通路的活化，分别在基因和蛋白水平，降低NF．r,BP65的表达，升高IKB．0t的表达，最终使依赖于NF．rd3信号转导通路的抗凋亡蛋白Bel．Xl的表达显著降低。因此，Lutein诱导胃癌SCK2．7901细胞的凋亡与细胞内ROS的含量以及NF．rd

7、3信号转导通路联系密切。关键词lLuteinSG-C．7901ROSNF．rd3ⅡAbstractAbstractBACKGROUND＆OBJECTIVE：Gastriccancerisaconlmonmalignancy，theincidenceofwhichranksfirstinChina．Althoughtherearcmanytraditionaltreatmentsassurgery,radiotherapy,chemotherapyandimmunothempy，whichextendthelifeofpatie