联合survivin反义寡核苷酸和基因重组融合蛋白对人膀胱癌细胞的抑制作用的论文

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1、联合survivin反义寡核苷酸和基因重组融合蛋白对人膀胱癌细胞的抑制作用的论文【摘要】目的用体外实验探讨联合应用survivin反义寡核苷酸、基因重组融合蛋白tp40是否对膀胱移行细胞癌t24细胞具有协同抑制作用。方法实验分为对照组、错义寡核苷酸组（ms）、反义寡核苷酸组（as）、tp40组和联合组（as+tp40）。rtpcr和tt法检测各组细胞生长情况；流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；体外成瘤实验检测各组细胞的体外锚定非依赖性生长能力。处理时间为3天。结果所合成as(300nm)对survivinmrna的表达具有明显抑制作用。分别从转录水平和表达水平

2、证明了联合组下调survivin的能力最强。mtt法显示联合组用药后生长抑制更加明显（p＜0.0001）,第3天细胞存活率仅12.2%，凋亡率达到96.37％。在软琼脂糖体外成瘤实验中，tp40组和as组的体外锚定非依赖性生长的能力大大降低，联合组（tp40+as）细胞几乎没有形成克隆。结论采用survivin反义寡核苷酸封闭survivin的表达，可以增强tp40对膀胱移行细胞癌t24细胞的生长抑制作用，呈现协同效应。【关键词】重组转化生长因子α；反义寡核苷酸；膀胱肿瘤；治疗inhibitoryeffectofrebinanttgfalphape40bi

3、nedacellsyanxiang1,dingqiang2,zhangyuanfang2,xuyonghua3,guohongqian11.departmentofurology,affiliateddrumtoolecularandcellularoncologyandlabofmolecularcellbiology,instituteofbiochemistyandcellbiology,shanghaiinstitutesforbiologicalsciences,chineseacademyofsciencesabstract：objecti

4、vetoinvestigateanbladdertransitionalcellcarcinomat24cellstorebinanttgfalphape40(tp40).methodstheexperimentcellsissenseoligonucleotidesgroup(ms),survivinantisenseoligonucleotidesgroup(as),tp40groupandbinedgroup(tp40+as).rtpcrandedtodetecttheexpressionofsurvivininallgroupscells.mtt

5、assayetryedtodetecttp40triggeredapoptosis.thetumorformationexperimentoft24cellsinvitro.onstratedfromthemrnalevelandproteinlevelthatthebinedgroupcoulddoorformationinvitroanbladdertransitionalcellcarcinomat24cellstotp40inggros;therapy膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一。.有10％～15％的非浸润性膀胱癌最终发展成浸润性膀胱癌或者发生

6、转移[1]。近年来，生物治疗为晚期膀胱癌的治疗提供了一条新的途径。先前已有研究表明重组转化生长因子α绿脓杆菌外毒素融合蛋白（tgfαpe40，简称tp40）对人膀胱癌细胞的生长具有抑制作用[1]。本研究旨在探讨联合survivin反义寡核苷酸和tp40对人膀胱癌细胞增殖的作用。1材料与方法1.1主要材料人膀胱癌t24细胞（简称t24细胞）和基因重组tp40由中国科学院上海细胞生物学研究所合成并提供。全程硫代修饰的survivin反义寡核苷酸（as）、错义寡核苷酸（ms）和rtpcr所用引物均由赛百胜公司合成。as序列5′cccagccttccagct

7、ccttg3’[2]，ms序列5′cccacccttgcacctccttg3′。1.2方法1.2.1细胞培养t24细胞培养在dmem（美国gibco公司）中，包含15％小牛血清（杭州四季青公司），100ku/l的青霉素和链霉素，并置于含5％co2的37℃培养箱中培养。1.2.2细胞转染将t24细胞在lipofectin（gibico/brl公司）介导下进行反义寡核苷酸的转染，操作按试剂盒说明进行。转染6h后用含15％小牛血清的dmem培养液终止反应。对照组采用含相同浓度lipofectin的无血清dmem培养液。1.2.3rna提取及rtpcr采用t

8、rizol一步法提取总rna。取2μl总rna，70