0酸检测试剂盒（pcr-荧光探针法）使用说明书

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1、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用说明书【产品名称】通用名称：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）商品名称：无英文名称：DetectionkitforHBV,HCV,andHIV-1(Real-timePCR)【包装规格】本产品的试剂组份包括核酸提取和核酸扩增两个部分：核酸提取试剂96人份/盒核酸扩增试剂96人份/盒【检验原理】病毒核酸提取采用磁珠法核酸纯化技术，纯化系统采用ChemagicSTAR液

2、体处理工作站。该系统可以自动完成样本和假病毒内标中的核酸的纯化过程，内标对单个样本的整个检测过程（包括核酸纯化和扩增检测）的有效性能起到监控作用。核酸纯化过程可依次分为病毒裂解，核酸与磁珠结合，洗涤，核酸洗脱四个过程。首先，样本中的病毒在裂解液和蛋白酶的作用下裂解释放出核酸，然后带负电荷的核酸在胍盐，高离子强度条件以及结合液的作用下，和表面带正电的磁珠相结合，再通过两次洗液洗涤后，样本中潜在的PCR抑制成分以及裂解液和洗液A中的盐成分被除去。最后，磁珠经加热干燥后，重悬于洗脱液，核酸从磁珠表面脱落从而完成了整

3、个核酸纯化过程，核酸检测采用PCR或一步法RT-PCR结合荧光探针的体外扩增检测技术（PCR-荧光法），在进行PCR扩增时体系中同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ1。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，从而对

4、血清或血浆样本中的核酸实现定性检测。内标检测所使用的引物与病毒核酸检测相同，而探针序列不同，探针标记的报告和淬灭基团分别为HEX和BHQ1。【主要组成成分】类别试剂名称组成试剂盒A裂解液120ml×1瓶磁珠悬液650μl×16支结合液150ml×1瓶洗涤液A300ml×1瓶洗涤液B300ml×1瓶洗脱液0.95ml×16支试剂盒BHBV主反应液A1536μl×1支HCV/HIV主反应液A748.8μl×2支HBV反应液B100μl×1支HCV反应液B100μl×1支HIV反应液B100μl×1支反应液C240

5、μl×1支反应液D80μl×1支DEPC水1ml×1支内标1160μl×2支蛋白酶1160μl×2支PolyARNA320μl×1支阳性标准品1.3ml×1支阴性对照1.3ml×1支配套仪器：全自动核酸提取工作站Chemagic-Star24；多通道荧光定量PCR仪ABI7500；手掌式离心机；平板离心机。配套耗材：24超深孔板磁棒套管洗脱管Hamilton1ml移液吸头96孔PCR反应板及配套管盖【适用范围】定性检测血浆或血清样本中乙型肝炎病毒DNA、丙型肝炎病毒RNA和人类免疫缺陷病毒I型RNA，主要适用

6、于血制品和血液核酸筛查。【注意事项、警示以及提示性内容】1.试剂盒各组分使用前需使其完全融化并摇匀，离心管内的试剂还需离心数秒使内容物沉于管底。2.样本处理和核酸扩增应在完全隔离的实验区域内进行。3.实验人员应经过严格的相关培训并具有一定经验。4.实验人员应穿着无纺工作服，并戴一次性的手套、口罩和帽子，帽子应将头发完全包住。5.建议使用带滤芯的吸头以防止交叉污染。6.所有耗材均为一次性用品，切勿重复使用。7.实验中使用的所有仪器，如核酸提取仪，离心机，超净台，移液器，PCR仪等，应定期用70%乙醇擦拭。8.试

7、验中废弃的吸头应弃于含1%次氯酸钠溶液的废液缸中，以防止污染。9.操作病毒阳性样本时，请按照传染病实验室检查规程操作。【储存条件】试剂盒A储存于室温。试剂盒B储存于-20℃。【有效期限】本试剂盒有效期为6个月，请务必在有效期内使用。【标本的收集和储存】1.样本可采用血清或血浆样本。血浆样本的收集可采用EDTA,CPD,CPDA1,CP2D,ACDA和4%柠檬酸钠抗凝。需注意样本的处理时间和温度，过高的环境温度会影响样本的稳定性。1.抗凝的血液样本应在48小时内，采用800–1,600xg离心20minutes

8、的方法分离血浆。采集的血浆样本于2~8℃保存，如果3天内不能用于检测，应将血浆转移到新的无菌采血管或无菌离心管中，储存于-20℃或更低的温度，保存期30天左右。冻存的血浆在检测前应避免不必要的冻融（冻融次数勿超过3次）。2.保存血浆样本的采血管应使用与HAMILTONMicrolabSTAR载架配套的13x100mm玻璃或塑料无菌采血管。血浆的体积不少于3ml。3.采集的全血样本切勿冻存。4.肝素对