大肠杆菌o104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

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1、天津生物芯片技术有限责任公司大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒说明书Cat.No.FP017大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒【产品名称】中文名称：大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒英文名称：RealTimePCRdiagnostickitforEscherichia coliO104【包装规格】20次/盒【预期用途】用于临床样品以及环境样品中的大肠杆菌O104的检测。【检测原理】试剂盒采用taqman荧光探针的技术，在反应过程中大肠杆菌O

2、104特异的荧光探针跟靶核酸杂交,同时被Taq酶水解,把探针上的荧光基团和淬灭基团分开,从而通过荧光增量来实时判断大肠杆菌O104的存在。【产品组成】大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒组份规格数量核酸提取液1ml/支3支大肠杆菌O104荧光PCR反应液160μl/支1支Taq酶12μl/支1支大肠杆菌O104阳性对照品100μl/支1支阴性对照品100μl/支1支DEPCH2O1ml/支1支【适用的RealTimePCR扩增仪】ABI、Roche、MJ、Bio-rad、Eppendo

3、rf等多种全自动荧光定量PCR检测仪【实验操作】1．基因组提取（1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。（2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100℃水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。（4）取上清液用于PCR检测。2．荧光定量PCR检测（1）按下列组份配制反应液（反应液配制请在冰上进行）大肠杆菌O104荧光PCR反应液：7.4μlTaq酶：0.3μl

4、样品DNA或阴阳性对照品：5μlDEPCH2O：12.3μl（2）PCR扩增95℃2min40Cycles95℃15sec60℃1min荧光检测在60℃，反应体系为25μl，荧光通道选用FAM通道。【结果判读】1．基线的设定（1）对于ABI系列仪器，分析前把参比荧光定为none，如果没有Ct<16第2页网址：http://www.tjbiochip.com/index.jsp电话：022-66229538天津生物芯片技术有限责任公司大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒说明书Cat.No

5、.FP017的强阳性标本，就选3-15个循环的平均荧光信号为基线分析；如果有Ct<16的强阳性标本，就将此标本定为AFUMIDNA>1010copy/ml，并将此样品从数据库中剔除，再以3-15个循环的平均荧光信号为基线再分析Ct。（1）对于iCycler仪器，基线一般按照自设值（2-10）即可，在实验结束后，选择PCRbaselinesubstract选项扣除基线值。若某些曲线出现了规则的剧烈的跳动，应视为非正常情况，将其从结果中剔除（击活selectwells,将此孔彩色点去，然后选择displayw

6、ells）并注意调整坐标，使所有曲线都在坐标以内。（2）对于lightcycler仪器，用荧光记数值F1/F2读取结果。基线设定原则以超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，且Ct值不出现任何数值为准（一般在0.001-0.05范围内）。2．阈值的设定应在扩增曲线的指数增长期内且高于阴性对照品的扩增曲线最高点，推荐将阈值设定在指数增长期和线性期的拐点处。3．结果分析Ct值无任何数值阴性结果38≤Ct值<40（重新检测2次）复检2次，Ct值无，阴性结果复检2次，其中至少1次Ct值<40，阳性结果Ct值<38阳性结

7、果【注意事项】1.实验前请仔细阅读本说明书。2.本试剂盒不做临床诊断。3.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。4.对每次实验进行质量控制。5.试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融，探针应避光保存。6.所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物

8、管理条例》。【保存条件】1．本试剂盒于-20℃保存。2．PCR反应液应避免反复冻融。【有效期】有效期为6个月。【生产企业】天津生物芯片技术有限责任公司地址：天津经济技术开发区宏达街23号一区邮编：300457网址：http://www.tjbiochip.com电话：（022）66229538传真：（022）66229596第2页网址：http://www.tjbiochip.com/index.jsp电话：022-66229