全反式维甲酸对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和vegf及vcam1表达的影响

《全反式维甲酸对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和vegf及vcam1表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、全反式维甲酸对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和VEGF及VCAM1表达的影响：李彦飞董果雄张社华【摘要】目的观察全反式维甲酸（atRA）对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和血管内皮生长因子（VEGF）、血管细胞黏附分子1（VCAM1）表达的影响。方法新西兰雄性大白兔36只，随机分为6组：治疗A、B组，对照A、B组，假手术A、B组。治疗组和对照组给予高脂饮食并行颈动脉内膜空气干燥术，假手术组手术暴露颈动脉而不损伤内膜，治疗组给予atRA连续灌胃。分别于术后7、28d处死A、B组动物，取病变血管进行形态学观察。免疫组织

2、化学方法检测病变血管VEGF、VCAM1表达水平。结果假手术组动脉内膜光滑，无粥样硬化病变及VCAM1表达。对照组术后7d动脉内膜层出现泡沫细胞，平滑肌细胞增殖，VEGF、VCAM1表达明显增加，28d时血管内膜明显增厚，有粥样斑块形成。治疗组动脉内膜增生较轻，28d时内膜面积低于对照组（t=4.770，P<0.001），动脉粥样硬化病变轻于对照组（H=4.89,P<0.05），VEGF、VCAM1表达低于对照组（t=3.280～4.288，P<0.01、0.05）。结论atRA可抑制

3、兔颈动脉内皮损伤后新生内膜增殖，下调VEGF、VCAM1表达是其作用机制之一。【关键词】维甲酸；血管内膜；血管内皮生长因子类；血管细胞黏附分子1　血管再狭窄是PTCA及支架植入术后主要并发症之一，生物活性因子在这一病理过程中发挥了重要作用，其中血管细胞黏附分子1（VCAM1）可促进单核细胞在血管内皮的聚集、黏附、迁移，而血管内皮生长因子（VEGF）可诱导多种细胞因子、炎症因子的表达促进血管内膜损伤[1]。全反式维甲酸（atRA）是维生素A的天然衍生物，近年来研究显示，它可通过调节基因转录影响细胞周期，抑

4、制血管平滑肌细胞（SMC）的表型转化、迁移、增殖[2～4]，是一种很有潜力的抗血管再狭窄药物。为此，本实验观察了atRA对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖情况及VEGF、VCAM1表达的影响，旨在进一步探讨其抗血管再狭窄作用机制。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料　　健康雄性新西兰大白兔36只，4月龄，体质量（2.5±0.12）kg,购自青岛市动物实验中心。atRA（重庆华邦制药公司），胆固醇（上海化学制剂公司），兔抗兔VEGF、VCAM1、SABC试剂盒（武汉博士德公司），Masson三色试剂盒（

5、福州迈新公司），奥林巴斯BX50显微镜（日本Olympus公司）。　　1.2动物分组及处理　　36只新西兰大白兔随机分为6组：治疗A、B组，对照A、B组，假手术A、B组，每组6只。治疗组和对照组每日进食150g高脂饲料（含质量分数0.060的猪油、质量分数0.015的胆固醇、质量分数0.925的基础饲料），假手术组每日喂养150g基础饲料，均自由饮水。治疗组术前3d开始每天将atRA6mg·kg-1溶于1mL植物油中灌胃至处死，对照组、假手术组给予等量植物油灌胃。喂养2周后行颈动脉内膜空气干燥术。治疗组、对照组

6、手术严格无菌操作，经耳缘静脉注射250g/L的乌拉坦1.0g/kg麻醉动物，取颈部正中纵形切口，分离右颈总动脉长2.0cm,选择无分支段，动脉夹夹闭两端，4.5号针头平行穿刺阻断血管的两端，9g/L的氯化钠注射液冲洗血管腔，向夹闭段的颈总动脉内以120mL/min流量注入空气，共10min，管腔内重新注入生理盐水，放开动脉夹，压迫止血，观察血流通畅后逐层缝合。假手术组手术至暴露颈动脉，不行损伤内膜操作。术后各组每天肌注青霉素40万单位，连续3d。分别于术后第7、28天处死A、B组动物，取病变部位血管等距切分3～

7、5段，40g/L的中性缓冲甲醛固定，石蜡包埋。　　1.3血管组织形态学测定及病变观察　　血管标本横截面连续切片，厚度4μm。切片行苏木精伊红（HE）及Masson染色，显微镜下观察血管结构，进行图像分析，测定每张切片上各个血管截面的内膜面积、中膜面积，计算内膜/中膜面积比，取平均值，用以评定血管狭窄程度。镜下观察术后28d血管组织切片动脉粥样硬化（AS）病变情况，按照美国心脏病学会对AS的分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）标准，以最重病变为准，对每例动物病变进行分期，计数每组动物各期病变例数。测量AS病变最厚处内弹力板至腔

8、面垂直距离，作为该例动物的最大斑块厚度。　　1.4免疫组化染色检测VEGF、VCAM1表达　　病变血管用SABC三步法进行VEGF、VCAM1免疫组化染色，体积分数0.03的过氧化氢灭酶，微波修复，一抗稀释度均为1∶200，室温孵育1h，DAB显色，苏木精复染。PBS代替一抗作阴性对照。显微镜下观察蛋白表达情况，VEGF在胞膜及胞浆表达，VCAM1表达于胞膜。随机测量每张切片中6