全反式维甲酸对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和vegf及vcam1表达的影响论文

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1、全反式维甲酸对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和VEGF及VCAM1表达的影响论文李彦飞董果雄张社华【摘要】目的观察全反式维甲酸（atRA）对兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和血管内皮生长因子（VEGF）、血管细胞黏附分子1（VCAM1）表达的影响。方法新西兰雄性大白兔36只，随机分为6组：治疗A、B组，对照A、B组，假手术A、B组。治疗组和对照组给予高脂饮食并行颈动脉内膜空气干燥术，假手术组手术暴露颈动脉而不损伤内膜，治疗组给予atRA连续灌胃。分别于术后7、28d处死A、B组动物，取病变血管进行形态学观察。免疫组织化学方法检测病变血管VEGF、VCAM1表达水平。结果假手术组动脉内膜光滑，

2、无粥样硬化病变及VCAM1表达。对照组术后7d动脉内膜层出现泡沫细胞.freelpus公司）。1.2动物分组及处理36只新西兰大白兔随机分为6组：治疗A、B组，对照A、B组，假手术A、B组，每组6只。治疗组和对照组每日进食150g高脂饲料（含质量分数0.060的猪油、质量分数0.015的胆固醇、质量分数0.925的基础饲料），假手术组每日喂养150g基础饲料，均自由饮水。治疗组术前3d开始每天将atRA6mg·kg-1溶于1mL植物油中灌胃至处死，对照组、假手术组给予等量植物油灌胃。喂养2周后行颈动脉内膜空气干燥术。治疗组、对照组手术严格无菌操作，经耳缘静脉注射250g/L的乌拉坦1.0

3、g/kg麻醉动物，取颈部正中纵形切口，分离右颈总动脉长2.0cm,选择无分支段，动脉夹夹闭两端，4.5号针头平行穿刺阻断血管的两端，9g/L的氯化钠注射液冲洗血管腔，向夹闭段的颈总动脉内以120mL/min流量注入空气，共10min，管腔内重新注入生理盐水，放开动脉夹，压迫止血，观察血流通畅后逐层缝合。假手术组手术至暴露颈动脉，不行损伤内膜操作。术后各组每天肌注青霉素40万单位，连续3d。分别于术后第7、28天处死A、B组动物，取病变部位血管等距切分3～5段，40g/L的中性缓冲甲醛固定，石蜡包埋。1.3血管组织形态学测定及病变观察血管标本横截面连续切片，厚度4μm。切片行苏木精伊红（H

4、E）及Masson染色，显微镜下观察血管结构，进行图像分析，测定每张切片上各个血管截面的内膜面积、中膜面积，计算内膜/中膜面积比，取平均值，用以评定血管狭窄程度。镜下观察术后28d血管组织切片动脉粥样硬化（AS）病变情况，按照美国心脏病学会对AS的分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）标准，以最重病变为准，对每例动物病变进行分期，计数每组动物各期病变例数。测量AS病变最厚处内弹力板至腔面垂直距离，作为该例动物的最大斑块厚度。1.4免疫组化染色检测VEGF、VCAM1表达病变血管用SABC三步法进行VEGF、VCAM1免疫组化染色，体积分数0.03的过氧化氢灭酶，微波修复，一抗稀释度均为1∶200，室温孵

5、育1h，DAB显色，苏木精复染。PBS代替一抗作阴性对照。显微镜下观察蛋白表达情况，VEGF在胞膜及胞浆表达，VCAM1表达于胞膜。随机测量每张切片中6个高倍视野的阳性部位平均吸光度和阳性面积百分比，取其平均值，二者乘积乘以100为阳性表达指数。1.5统计学处理计量资料数据以±s表示，使用SPSS11.0统计软件进行t检验或方差分析；计数资料比较采用H检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1血管组织形态和AS病变情况实验动物无死亡或患病的情况，切口愈合良好。假手术组颈动脉内膜光滑，7和28d血管结构无明显差别，内皮细胞完整，呈单层紧贴内弹力板，中膜血管SMC环形规则排列。对照组术

6、后7d时血管内皮再生，尚未完全覆盖管腔，内弹力板多处断裂，有SMC迁移入内膜，内膜层出现泡沫细胞。28d时镜下可见内膜层有大量SMC增生，排列紊乱，泡沫细胞聚集,有脂质池、脂质核心形成，中膜亦出现泡沫细胞，动脉内膜明显增厚，并可见粥样硬化偏心性狭窄。治疗组病变与对照组相似，但程度较轻，内膜增厚明显轻于对照组。术后28d时对照组有1例Ⅰ期AS病变，5例Ⅱ期AS病变，治疗组有5例Ⅰ期AS病变，1例Ⅱ期AS病变，治疗组病变轻于对照组（H=4.89,P0.05）。对照组斑块厚度（0.21±0.09）mm，治疗组为（0.09±0.04）mm，治疗组斑块厚度低于对照组，差异有显著意义（t′=2.87,

7、P0.05）。术后7d时治疗组内膜面积、内膜/中膜面积比与对照组比较，差异无显著意义(t=1.004、1.502,P0.05)；术后28d时治疗组内膜面积、内膜/中膜面积比均低于对照组（t=4.770、5.092，P0.001）。术后7、28d时各组间中膜面积比较无明显差异(F=1.723、1.234,P0.05）。见表1。2.2atRA对血管VEGF、VCAM1表达的影响假手术组动物术后7、28d仅血管内皮有微量VE