流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异

《流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异【摘要】　　目的:建立流式微球载体技术（FMA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清抗HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG及细胞因子含量的新方法。方法:选择28例临床确诊的HFRS患者及20例健康人血清标本,FMA定量检测抗HFRS病毒IgM和IgG;定量检测细胞因子IL6和TNFα。检测结果与ELISA法进行比较。结果:FMA检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为92.85%和71.43%,健康对照组的抗体阳性率（假阳性率）为0;HFRS患者血清IL6和TNFα的含量分别为

2、(532.62±397.19)ng/L和(392.68±177.68)ng/L,明显高于健康对照组（38.77±20.32）ng/L（P<0.01）和(15.91±6.91)ng/L（P<0.01）。ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为71.43%和50.00%,健康对照组的抗体阳性率（假阳性率）为0;HFRS患者血清IL6和TNFα的含量分别为(256.46±102.51)ng/L和(45.63±5.32)ng/L,高于健康对照组(53.8±19.21)ng/L（P<0.01）和(5.81±

3、3.58)ng/L（P<0.01）。结论:建立了FMA法对HFRS患者的特异性抗体和IL6和TNFα的检测,其灵敏度明显优于ELISA法,为HFRS的临床诊断和病理机制研究提供了新的方法。【关键词】肾综合征出血热;IL6;TNFα;流式细胞术;免疫酶技术　　［Abstract］AIM:Toestablishafloicrobeadsassay(FMA)toexaminethelevelofhemorrhagicfeverevirus(HFRSV.)specificIgM,IgGandcytokinesinHFRSpatients.METH

4、ODS:Serumsamplesfrom28casesofHFRSand20healthycontrolslevelsofantiHFRSV.antibodiesmatorycytokinesIL6andTNFαlevelofIL6andTNFαinHFRSgrouplevelofIL6andTNFαinHFRSgroupethodisestablishedtomonitortheimmuneresponseinHFRSpatients,orrhagicfevere;IL6;TNFα;Floetry;immunoenzymetechnolo

5、gy　　肾综合征出血热（hemorrhagicfevere,HFRS）是由HFRS病毒引起的自然疫源性急性病毒性传染病。临床上,检测特异性IgM、IgG和细胞因子的方法仍以ELISA法为主,该技术是以包被在酶板上的抗原(或抗体)与标本中的抗体（或抗原）反应,形成抗原抗体复合物,再用酶标二抗和酶底物显色,通过酶标仪检测。该方法的灵敏度存在缺陷,并且是一种非均相法检测,必需将未结合的抗体和酶标二抗分离出去后才能进行读数,因而增加了操作时间、操作步骤和系统误差。　　流式微球载体技术(floicrobeadsassay,FMA)是利用流式细胞术（FC

6、M）和高聚分子微球载体技术检测可溶性生物分子的新技术。原理是在聚苯乙烯微球上进行抗原抗体反应,用荧光物质标记的二抗为示踪剂,通过流式细胞仪进行检测。该方法灵敏度高,可作均相法分析,减少了操作步骤和时间。我们采用FMA检测HFRS患者血清中特异性IgM、IgG及细胞因子含量,并与ELISA方法进行了比较。　　1材料和方法　　1.1材料　　陕西省疾病预防控制中心病毒研究室提供的HFRS患者血清28例,其中男18例,女10例,年龄17～52岁,平均年龄30.6岁。FACSCalibur流式细胞仪、荧光校准微球（FloA试剂盒由比利时鲁汶大学医学院馈

7、赠。HFRS病毒抗体定性检测试剂盒主要成分包括:基因工程重组汉滩病毒抗原包被聚苯乙烯微球,荧光素（FITC）标记羊抗人IgM和IgG,阴性对照血清和阳性对照血清。人IL6和TNFα试剂盒主要成分包括:鼠抗人IL6或TNFα抗体包被聚苯乙烯微球,荧光素（FITC）标记鼠抗人IL6和TNFα抗体,不同浓度梯度的IL6和TNFα标准品。肾综合征出血热病毒IgM、IgG检测试剂盒购自北方生物技术研究所,IL6、TNFα生物素亲和素酶联免疫技术法检测试剂盒购自晶美生物工程有限公司。　　1.2方法　　1.2.1FMA检测血清特异性抗体　　（1）血样采集

8、:空腹抽取HFRS病人和健康人静脉血2mL,分离血清,-20℃保存。（2）检验方法:①管1空白对照:只加微球载体。管2零标准管:加微球载体和标记抗体。