检测抗肾综合征出血热病毒mab在患者体内代谢的方法建立与应用论文

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1、检测抗肾综合征出血热病毒mAb在患者体内代谢的方法建立与应用论文杨文涛，徐志凯，王海涛【关键词】肾综合征性出血热【Abstract】AIM:TostudythepharmacokiicsofmurineMcAbofantiHFRSvirusinpatientstreatedethodsurineIgGandhumanantimouseantibody,thusdetecting165seraofthesecondperiodandthirdperiodclinicaltrials.RESULTS:BothkindsofmethodsurineIgGreacheditspeak13d

2、aftertheMcAbinjectionandtheaverageconcentrationg/L.Sixtotendaysafterinjection,theaverageconcentrationdeclinedto(0.21±0.21)mg/L.TurineIgGcouldnotbedetectedinmostcases.TheproductionofhumanantimouseantibodyoccurredmainlyaftertetabolismofmurineMcAbisrapid.Thehumanantimouseantibodyproducedin12ddoes

3、notinfluencethemetabolismofmurineMcAb.【Keyorrhagicfevere;antibodiesmonoclonal;enzymelinkedimmunosorbentassay【摘要】目的：研究抗HFRS病毒鼠源性mAb治疗HFRS患者后其体内血药浓度的变化以及抗鼠抗体的产生情况.方法：建立检测人血清中鼠IgG及抗鼠抗体的ELISA方法，并以此检测二期及三期临床试验的HFRS患者血清165份.结果：建立的两种方法均特异性强，敏感度高，稳定性好.观察到血清中鼠IgG血药浓度在用药后1~3d最高，平均为(1.04±0.84)mg/L；随后迅速下降

4、，6~10d组平均浓度为(0.21±0.21)mg/L；用药12d以后绝大多数已测不到.而抗鼠抗体主要产生在用药12d以后.freelAb（鼠IgG）在HFRS患者体内代谢较为迅速，而12d后产生的抗鼠抗体不是影响其代谢的主要因素.【关键词】肾综合征性出血热；抗体，单克隆；酶联免疫吸附测定0引言“抗肾综合征出血热病毒mAb”（以下简称抗HFRS病毒mAb）是本室与武汉生物制品研究所合作研制的用于治疗肾综合征出血热（hemorrhagicfevere，HFRS）的一种新生物制品，2000年经国家食品药品监督管理局批准进入临床研究.该mAb制剂为鼠源性mAb，IgG亚类为小鼠IgG1［

5、1］，为了解其治疗HFRS患者后在人体内血药浓度的变化以及抗鼠抗体的产生情况，我们建立了检测鼠IgG及抗鼠抗体的ELISA方法，并检测了该mAb制剂二期及三期临床试验中的血清共165份.1材料和方法1．1材料抗HFRS病毒mAb标准品，武汉生物制品所生产，冻干粉制剂，批号950602，标示量5mg/支.Fc片段特异性山羊抗小鼠IgG，购自美国PIERCE公司，产品号：31170，标示量1.5mg.HRP标记山羊抗小鼠IgG，购自北京中山公司，为分装美国Jackson公司产品.抗HFRS病毒mAb治疗后的HFRS患者血清6份，均为用药后9d以上者，抗鼠抗体阳性.抗HFRS病毒mAb1

6、A8，本室自制腹水，辛酸硫酸铵法提纯成IgG，浓度1g/L.HRP标记羊抗人IgG，购自武汉博士德公司.酶标仪：TECSUN公司，型号SUNRISE.1．2方法①被检血清分组：经抗HFRS病毒mAb一次性iv治疗［2］前后的HFRS患者血清165份.将这些血清按用药前后的时间分为4组：用药前组（n=36）、用药后1~3d组（n=16）、用药后6~10d组（n=63，主要是用药后7d的血清）及用药后12d以上组（n=50，主要是用药后14d的血清）.②检测鼠IgGELISA方法的建立：用包被液（pH9.5碳酸盐缓冲液）稀释Fc片段特异性山羊抗小鼠IgG至1mg/L，加入酶标板100μ

7、L/孔，4℃过夜，含100mL/L小牛血清的PBSTAb标准品，37℃1h，加入1∶4000稀释的HRP羊抗鼠IgG，37℃1h，OPD显色30min.③检测抗鼠抗体ELISA方法的建立：包被5mg/L1A8，4℃过夜，含100mL/L小牛血清的PBSTin.④抗HFRS病毒mAb治疗患者血清中鼠IgG及抗鼠抗体的检测：使用上述2种ELISA方法检测，并对结果进行统计分析.统计学处理：全部数据均以x±s及几何均数G表示，应用SPSS11.0统计软件进行统计分析：对鼠I