抗重金属铅离子mab的制备及elisa检测方法的建立

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1、PreparationofMonoclonalAntibodiesAgainstHeavyMentalLeadIonandEstablishmentofELISAMethodADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringAgronomyCandidate：LiYiSupervisor:Prof.WangZi-liangHenanInstituteofScienceandTechnologyJ

2、une,2015本研究由―十二五‖国家科技支撑计划专题―重金属离子抗体的制备及其产品研发‖（2011BAK10B01-15）提供资助摘要铅是的用处极广，同时也是对人类危害最大的重金属。近年来，铅的污染问题日益严重，遭受其危害的人数也越来越多。铅对机体毫无益处，对神经系统、心血管系统、生殖系统、消化系统、免疫系统等都有毒害作用。由于重金属传统检测方法的诸多弊端，本论文利用免疫学分析技术制备出抗铅离子单克隆抗体，研制出铅离子检测试剂盒，建立了重金属铅离子快速检测体系。通过异硫氰酯法将铅离子和蛋白分子（BSA/OVA）偶联到双功能偶

3、联剂ITCBE上，2+2+制备出人工抗原Pb-ITCBE-BSA和Pb-ITCBE-OVA，并通过包括紫外分光光度法、ICP-AES法、SDS-PAGE、免疫鼠多抗血清ELISA鉴定，证明人工抗原制备成功。其结2+2+果为：Pb-ITCBE-BSA和Pb-ITCBE-OVA的蛋白浓度分别为5.26mg/mL、6.90mg/mL，2+2+其Pb含量分别为46.14mg/L、18.60mg/L；Pb-ITCBE-BSA免疫小鼠后效价达到1：52+1.024×10，阻断ELISA检测到多抗血清对Pb的半数抑制浓度IC50为25.88

4、ng/mL，与其他重金属离子基本上无交叉反应。2+用Pb-ITCBE-BSA免疫5只Balb/C小鼠，通过ELISA检测多抗血清的方法挑选出最优小鼠，取其脾脏与NS0细胞进行融合。通过ELISA法对杂交瘤细胞上清液进行检2+测后，筛选出1B7F4，2G5A2，2B7C11三株对Pb敏感特异的单克隆杂交瘤细胞株。2+运用体外诱生腹水法大量制备抗重金属Pb单克隆抗体。其结果为：1B7F4，2G5A2，332B7C11三株单抗细胞株上清液ELISA检测效价分别为1：2.56×10、1：1.28×10、1：32.56×10，IC50分

5、别为37.068ng/mL、45.081ng/mL、34.276ng/mL，其同种型鉴定结果分别为IgG1/κ、IgG1/λ、IgG2a/κ，与其他重金属基本上无交叉反应。其中特异性最好的952B7C11单抗细胞株亲和常数Ka为2.69×10，腹水效价为1：1.6384×10.2+对试剂盒最佳工作浓度的选择进行测定，用2B7C11株产生的单抗组装Pb检测试剂盒，并对其性能进行测定。该试剂盒的灵敏度为5.32ng/mL.饲料样、猪尿样、猪血清样的平均添加回收率分别为82.14、82.76%、82.64%，平均批内变异系数分别为1

6、4.5%、14.2%、13.2%，平均批间变异系数分别为13.23%、11.73%、14.3%，与其他重金属基本上无交叉反应，且试剂盒性能稳定。2+2+关键词：重金属Pb；人工抗原；单克隆抗体；Pb检测试剂盒IABSTRACTLeadisnacessaryindailylife,meanwhileitisoneofthemosttoxicheavymentals.Thepollutionofleadisgettingseriousinrecentyears,andthisisendangeringhuman.Leadpoiso

7、ninghasbeenshowntobetoxictothenervous,cardiovascular,genital,digestiveand2+immunesystem.ImmunoassaysforquantitativemeasurementofPbofferseveraladvantages2+overothertraditionalmethods.Ourstudygetthemonoclonalantibody(mAb)toagainstPb,andusedthemAbdevelopedthequantitati

8、veindirectELISAfortheleadionwasusedtodetectenvironmentalleadcontentinwatersourcesorothersamples.Alead-chelate-proteinconjugatewaspreparedv