牛支原体单克隆抗体的制备及其双抗夹心elisa检测方法的建立

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1、分类号密级：内部华中农业大学硕士学位论文牛支原体单克隆抗体的制备及其双抗夹心EL

2、SA检测方法的建立PreparationofMonoclonalAntibodiesAgainstMycoplasmaBorisandtheEstablishofSandwichELISADiagnosticMethod研究生：任泽民指导教师：郭爱珍教授指导小组：陈焕春教授金梅林教授周锐教授何启盖教授吴斌教授方六荣教授肖少波教授钱平教授专业：预防兽医学研究方向：动物传染病学获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2012年6月华中农业大学动物医学院二。一二年六月本研究由农

3、业公益性行业科研专项(201003060)和现代农业(肉牛)产业技术体系专项资金(CARS一38)资助华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文冕如需保密，解密时间孑吖律15f月三朔是否保密‘独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我-I司a：作的同志对本研究所做的任何贡献均巳在论文中锹了明确的说明，并表示了谶意．研

4、究生签名：乒移7嗲氏时阔：击矽／．1年∥月尹日学位论文使用授权书本人完全了解“华中农韭大学关于保存、使用学位论文的规定”，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印剧本和电子版本；学校有权保存提交论文的印捌版和电子版，并提供目录检索和阏览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方武在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容．注：保密学位论文在解密后适月l于本授权书．⋯⋯：彻枫⋯：研矧，签名日期：支口眨年石月如签名日期：#,o／z牟-否月／．t"B牛支原体单克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法

5、的建立目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．ⅡI缩略语表(ABBREVIATION)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯V第l章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1病原学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．2牛支原体在国内外的流行现状及对经济的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．3牛支原体致病机理研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

6、1．4临床及病理特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．5实验室诊断方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯51．5．1病原分离培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．5．2抗体水平检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．5．3PCR检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一61．5．4LAMP检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．5．5基于单克隆抗体的诊断方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第2章牛支原体单克

7、隆抗体与多克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．1研究目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．2材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．2．1实验动物、细胞株与菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．2．2主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．2．3相关溶液与培养基的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～102．2．3．1牛支原体培养基配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．2．3．2单克隆抗体制备相关溶液和培养基的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一10

8、2．2．3．3ELISA主要溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．2．3．4抗体纯化相关溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l2．2．3．5SDS．PAGE相关溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l2．2．3．6Westernblot相关溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122-3方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．3．1抗牛支原体单克隆抗体的制各⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。122．3．1．1牛支原体抗原的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．3

9、．1．2小鼠免疫⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12华中农业大学2012届硕士研究生学位论文2．