甘露聚糖酶多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立-论文.pdf

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1、畜牧与饲料科学Anima1日6nndandFeedScience2014，35(1)：12-13甘露聚糖酶多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立范文斌，王和平，刘永斌(1．呼和浩特职业学院，内蒙古呼和浩特010051；2．内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特01018；3．内蒙古农牧业科学院．内蒙古呼和浩特010031)摘要：该研究旨在建立一种检测转B一甘露聚糖酶基因大肠杆菌表达产物的有效方法。由于表达量有限及产物结构的变化，常规的检测方法不能准确地判断表达产物的性质，因此，该研究运用自制的抗原和抗血清建立酶联免疫法来进行检测。检测结果表明，转p一甘露聚糖酶

2、基因大肠杆菌成功地表达了p一甘露聚糖酶。关键词：抗血清；13-甘露聚糖酶：酶联免疫法中图分类号：$852．43文献标识码：A文章顺序编号：1672—5190(2014)01—012—02PreparationofPolyclonalAntibodiesofMannanaseandtheEstablishmentOfELISADouble．．antibodySandwichMethodFANWen—bin．WANGHe—ping~．LIUYong—bin(1．HohhotVocationalCollege，Hohhot01051，China；2．InnerMon

3、goliaAgriculturalUniversity，Hohhot01018，China；3．InnerMongoliaAcademyofAgricultural＆AnimalHusbandrySciences．Hohhot01031，China)Abstract：ThepurposeofthisstudywastoestablishaneffectivemethodfordetectingtheexpressedproductbyEscherichiacolitransformedby3-mannanase．Duetolittleexpressionamo

4、untandthechangesofproductstructure，theconventionaldetectionmethodcouldntaccuratelyjudgethepropertiesofexpressionproduct．Sotheselfmadeantigenandanti-serumwereusedtoestablishELISA．ThedetectionresultsshowedthatEcolitransformedby3-mannanasecouldsuccessfullyexpress3-mannanase．Keywords：an

5、tiserum；B—mannanase；ELISAB一甘露聚糖酶在食品工业中以及在饲料工业中小白鼠10只，作为免疫动物，将实验室自制的高纯度作为饲料添加剂都有着广泛的应用。而在饲料中添加的RutC一30里氏木霉一甘露聚糖酶作为抗原来免纤维素酶对纤维素的降解效果有限，饲料的利用效率疫。免疫2种动物的方法都采取皮下分多个部位注不能大幅度的提高，而当这种酶长期存在于动物体射，共免疫3次，时间间隔为2周，初次免疫加等量的内，这样就会大大提高动物对纤维素的利用率。通过完全佐剂。加强免疫加等量不完全佐剂。每只兔的免将转B一甘露聚糖酶基因大肠杆菌植入猪的大肠内，疫剂量是1m

6、g，每只小鼠的免疫剂量为100Ixg。家兔让这种菌长期定植并且分泌B一甘露聚糖酶，这样就采取颈动脉放血，小鼠用摘除眼球的方法取血，分离实现了提高纤维素降解率的愿望。该研究的目的是建血清，在一20cc冻存备用]。立一种B一甘露聚糖酶的准确的检测方法_1]，以检测肠1．2．2直接ELISA法确定2种酶标二抗的最适合稀道中的菌是否分泌了B一甘露聚糖酶。释倍数：分别将1：200稀释的兔抗血清和鼠抗血清包被l材料和方法酶标板．用1％BSA封闭，将2种酶标二抗用1％的BSA1．1材料从1：1000稀释到l：1100⋯⋯直至稀释到1：1600，加1．1．1主要仪器试剂：酶标

7、仪(TECAN)，96孔酶标板入包被好的酶标板，再加入底物，150L／孑L反应15min，(Nunc)，羊抗兔HRP—IgG(华美生物工程有限公司)，然后用2mol／L的H2SO50孔终止反应，用酶标仪羊抗鼠HRP—IgG(华美生物工程有限公司)，完全弗氏在492nm测OD值。比较所测得的OD值，将开始变佐剂，不完全弗氏佐剂。小时的稀释倍数确定为最适稀释倍数H]。1．1．2实验动物：雌性KM小白鼠(内蒙古大学动物1．2．3ELISA法确定抗原的最适浓度：将纯化的B一甘中心)，健康雄性兔(内蒙古农业大学)。露聚糖酶用包被缓冲液稀释成1、3、5直到15Ixg／mL

8、1．2方法系列浓度，然后包被酶标板，封