甘草酸多克隆抗体的制备及ELISA方法建立.pdf

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1、时珍国医国药2011年第22卷第12期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．12甘草酸多克隆抗体的制备及ELISA方法建立李刚，赵静，何素平，邓艾兴，李召虎，何钟佩，赵环环，王保民(1．吉林省农业科学院农业环境与资源研究中心，吉林长春1300332．中国农业大学农学与生物技术学院，北京100094)摘要：目的制备甘草酸多克隆抗体及建立甘草酸酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。方法通过碳化二亚胺法活化甘草酸与载体蛋白BSA联结制备免疫抗原，并免疫Balb／c小鼠，获得了甘草酸多克隆抗体并建立了甘草酸ELISA检测方法

2、用所建立的甘草酸ELISA检测方法对4个甘草样品进行了检测并用HPLC法加以验证。结果抗体效价>3．2X10。，与甘草次酸的交叉反应率为24．2％。ELISA检测范围为3～120ng／ml，IC。为20rig／ml。添加实验的回收率为103．5％～108％。结论ELISA方法测定的数据与HPLC方法测定的数据有很好的相关性(R=0．9901)。关键词：甘草酸；抗体；酶联免疫吸附测定法D0I标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2011．12．058中图分类号：R283文献标识码：A文章编号：1008-0805(2011)12-2956-03Preparati

3、onofGlycyrrhizinicAcidPolyclonalAntibodyandDevelopmentofELISAforGlycyrrhizinicAcidDetectionLIGang一，ZHAOJing，HESu．ping，DENGAi—xing，LIzhao—hu，眦Zhong．pei，ZHAOHuan—huan，WANGBao—min(1．AgriculturalEnvironmentandResourcesResearchCenter，JilinAgriculturalScienceandTechnologyCollege，Changchun132109，China

4、；2．CollegeofAgronomyandBiotechnology，ChinaAgriculturalUniversity，Bering100094，China)Abstract：ObjectiveToproducepolyclonalantibodies(PcAbs)andtodevelopanenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)forglycyrrhizinicacid．MethodsGlycyrrhizinicacid(GA)wascovalentlyconjugatedtocarrierprotein(bovineserumalb

5、umin，BSA)toprepareimmunogenbythecarbodiimide(CDI)method．GA—BSAconjugatewasusedtoimmunizeBalb／cmicetoproducepolyclonalantibodies(PcAbs)．Anenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)forglycyrrhizinicacidwasdeveloped．ResultsTheantibodytiterwasfoundashigherthan3．2×10．Cross—reactivitywithglycyrrheticacid

6、was24．2％．Thedetectionrangewas3～120nmlandthevalueofIC50was20ng／m1．RecoveriesofGAspikeswerebetween103．5％and108％．ConclusionGlycyrrhizinicacidcontentoffourpowderylicoricerootsampleswasdeterminedbyELISAandvalidatedbyHPLC．ResultsshowthatdatadeterminedbytheELISAarehighlycorrelatedwiththosebyHPLC(R0．99

7、01)．Keywords：Glycyrrhizinicacid；Antibody；ELISA甘草是一种最常见的中草药，其采集与药用在我国已有四、部分再与载体蛋白联结制得。本研究拟通过碳二亚胺法活化甘五千年的历史。过去药用甘草都是野生甘草，现在由于野生资源草酸分子的羧基再与载体蛋白联结来合成免疫抗原，并制备抗甘濒临灭绝，市面上的甘草大多是人工栽培。甘草酸是甘草的主要草酸多克隆抗体，建立甘草酸的酶联免疫吸附测定法，为国内人药用成分，也是甘草品质最重要指标之一_