甲胎蛋白对人肝癌bel7402细胞caspase信号传递及耐受trail的影响

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1、甲胎蛋白对人肝癌Bel7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响：李孟森，詹志农，周升，刘新华，李刚【摘要】目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响，以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase3、caspase8在Bel7402细胞内的共定位；免疫共沉淀(CoIP)技术研究AFP与caspase3、caspase8的相互作用；RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达，并用TT法分析干扰AFP表达30h后再给予TRAIL(2nmol/

2、L)处理24h，Bel7402细胞的生长情况，并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况。结果共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase3、caspase8主要表达于Bel7402细胞的细胞质，发现AFP能与caspase3共定位于细胞质，但与caspase8在细胞质的共定位可能性很小；CoIP技术研究发现AFP能与caspase3结合，但不能与caspase8结合；2nmol/L剂量的TRAIL单独处理Bel7402细胞并不能显著改变caspase3活性，但能提升caspase8活性，而用全反式维甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2nmol

3、/L)处理时，则能提高Bel7402细胞caspase3活性；干扰AFP表达后，单独用TRAIL(2nmol/L)也能激活caspase3，而干扰AFP表达前后对caspase8活性没有显著性改变；MTT分析发现，2nmol/L剂量的TRAIL对Bel7402细胞的生长并没有显著性抑制作用，但是干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能明显抑制Bel7402细胞生长(抑制率为48.4%)；荧光显微镜观察表明，干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能诱导Bel7402细胞凋亡。结论AFP选择性抑制caspase3活性是阻断人肝癌Bel7402细胞内凋亡信息传递的重要机

4、制，也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节。【关键词】甲胎蛋白；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；肿瘤耐药；肝癌细胞；caspase信息通路ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectsofalphafetoprotein(AFP)onthetransductionofapoptoticsignalinhepetocellularcancinomacells(HCC)andtheroleofAFPincounteractingtheapoptosisinducedbytumornecrosisfactorrelatedapoptosisind

5、ucingligand(TRAIL)ofHCC.MethodsLaserconfocalmicroscopymunoprecipitation(CoIP)olecules,caspase3orcaspase8.ShortsmallRNAinterfering(siRNA)techniqueetricmethods.Bel7402cellsSupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.30660071,30760090,30671856,30772536)andtheFoundationofNationalEdu

6、cationMinistryforGraduateProgramofChina(No.20070001735)inisteredol/L)for24hafterknockdoicroscopy.ResultsAFPcouldinteract,butcouldnotbindol/L)plusTRAIL(2nmol/L)alsoenhancedtheactivityofcaspase3orcaspase8,ol/L)alonefor24h,theactivityofcaspase8entol/L),theactivityofcaspase3ainedthesameasknockd

7、oicroscopy.ConclusionAFPcanblockthetransductionofapoptoticsignalbyselectivelyinhibitingtheactivityofcaspase3,andthisisalsothepivotaleventthatAFPcounteractstheapoptosisinducedbyTRAILofhepatomacells.KEYS1143P0)为LabVisionCorporati