人源肝癌裸鼠模型甲胎蛋白基因甲基化模式对基因表达的影响

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1、英文摘要英文缩写FullEnglishName(Abbreviation)Alpha-fetusprotein(AFP)Ammoniumpersulfate(AP)bisaerylamide(BIS)Basepair(bp)bisulfitesequencingPCR(BSP)bisulfitegenomicsequencing(BGS)complementaryDNA(cDNA)diethylpyrocarbonate(DEPC)deionizedwater(DW)dimethylsulfoxide(DMS

2、O)deoxvribonucIeicacid(DNA)deoxyridonucleosidetriphosphate(dNTP)ethylenebromide(EB)elhvle矬edial矬inetefa．aeeticacid(EDTA)如talcalfserum(FCS)Sodiumdodecylsulfate(SDS)hepatitisvirus(HBV)hepatocellularcarcinoma(HCC>kilobasepair(kb)modificativeDNA(MoDNA)molecular

3、(Mr)methylationspeeificalPCR(MSP)Chinese甲胎蛋白过硫酸胺双丙稀酰胺碱基对亚硫酸氢盐测序PCR亚硫酸氢盐基因组测序互补DNA焦碳酸二乙酯去离子水二甲基皿砜脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷三磷酸滨化乙锭乙二胺四乙酸胎牛皿清十二烷基硫酸钠乙型肝炎病毒肝细胞癌千碱基对修饰DNA分子量甲基化PCRnitrocellulose(NC)英文摘要Nationalcenterforbiotechnologyinformation(NCBI)Phosphatebufferedsaline(PBS)

4、硝酸纤维素膜美国国立生物信息中心磷酸盐缓冲生理盐水Polymerasechainreaction(PCR)聚合酶链发应ribonucleicacid(RNA)reversetranscriptase(RT)Tris．boracicacidbuffer(TBE)核糖核酸逆转录酶Tris一硼酸缓冲液N，N，N’，N7一tetramethylethylenediamine(TEMED)四甲基乙二胺trishydroxymethylaminomethane(Tris)三羟甲基氨基甲烷ll河北医科大学学位论文使用授权及

5、知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河冀艺医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：俞蔽导师签名：露轨墨学院领导签名：砂g年；月习日研究生学位论文独创性声明印h本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文

6、中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：俪卜堤日01遥月乏多2，砾年g：万名签师导中文摘要人源肝癌裸鼠模型AFP基因甲基化状态对基因表达的影响摘要目的：DNA异常甲基化在肿瘤的发生发展中具有重要的作用。本文旨在探索甲胎蛋t刍(AFP)基因启动子区域甲基化状态与其表达水平之间的关系。方法：1．细胞培养：选取人源MHCC97H肝癌细胞株，传代培养，用于提取细胞总蛋白、RNA和DNA。2．原位移植裸鼠模型：购买人源MHCC97H肝癌细胞株原位移植术

7、后的人源肝癌裸鼠模型10只饲养．六周后断颈处死，取肝癌组织，提取组织蛋白、RNA及DNA。3．模型鉴定：分别提取细胞株及组织的基因组DNA，．20℃保存备用。以动物肝癌组织基因组DNA为模板，PCR扩增AFP基因启动子区域，将扩增产物进行测序，并与人AFP基因启动子序列对比，以确定模型的成功建立。4．WesternBlot：将提取的MHCC97H肝癌细胞总蛋白、人成纤维细胞总蛋白及动物肝癌组织蛋白进行SDS．PAGE电泳，转膜，封闭，免疫结合及显影，测定细胞及肝组织中AFP蛋白的表达。以13-actin为内参

8、照，对比AFP表达水平。5．在线软件(http：／／www．humgen．nl／primer．)设计基因启动子区MSP／BSP引物；普．d通es引ign物ht由mlAFPPrimerPremier5．0软件设计。6．RT．PCR-TRIzol提取细胞及组织RNA，逆转录为cDNA；中文摘要以cDNA为模板PCR合成AFP基因片断．以13-actin为内参照，凝胶图像分析软件分析，对比AFP表达水平．