海藻糖对液氮保存同种带瓣大动脉组织结构的影响

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1、海藻糖对液氮保存同种带瓣大动脉组织结构的影响：盛存见徐平常青刘旭吴玉辉于仁斌盛存见【摘要】目的观察3种不同保护剂对液氮冻存同种带瓣大动脉组织结构影响，寻求最佳冷冻保护剂。方法单独使用0.1mol/L二甲亚砜(对照组)及单独使用0.1mol/L海藻糖（实验组1）和0.1mol/L二甲亚砜+0.1mol/L海藻糖(实验组2)作为冷冻保护剂,用光镜及电镜对新鲜组织及液氮保存6、9、12个月的带瓣大动脉进行形态学观察。结果随着保存时间的延长，3组结构破坏均逐渐加重。光镜下观察，保存超过6个月后，3组形态学与新鲜组织比较均有改变（d=17～30，P

2、<0.01），3组之间比较差异有显著意义（d=6～13,P<0.01、0.05）。电镜下观察,保存6、9、12个月时，对照组的同种带瓣大动脉组织的超微结构改变十分明显,实验组1改变较对照组轻，实验组2的结构改变最轻。结论海藻糖对液氮保存的带瓣大动脉有较好的保护作用;单独使用0.1mol/L海藻糖保护效果优于单独使用0.1mol/L二甲亚砜，二者联合应用保护效果明显好于单独使用。【关键词】同种瓣;低温保存;海藻糖　　［ABSTRACT］ObjectiveToparetheeffectsofthreecryoprotectants

3、onthestructureofallogeicaorticvalvespreservedinliquidnitrogen(LN)andsearchfortheoptimalone.MethodsTheallograftpreservedin0.1mol/LDMSOservedascontrolgroup;in0.1mol/Ltrehaloseasexperimentgroup1,andin0.1mol/LDMSOplus0.1mol/Ltrehaloseasexperimentgroup2.Themorphologyofthefresh

4、tissueandthathadbeenpreservedbyLN6,9and12monthsicroscopicallyandelectronmicroscopically.ResultsThestructuresofthetissuesinthethreegroupsicroscopically,themorphologyofthetissuesinthethreegroupsaftersixmonthsofpreservationongthethreegroupsicroscopically,thechangesoftheultr

5、amicrostructureoftheaortictissueinthecontrolgroupaticallyafter6,9and12monthsofpreservation,thechangesingroup1ilder,andthatingroup2,themildest.ConclusionTrehaloseisagoodcryoprotectantfortheallogeicaorticvalvepreservedintheLN.Thecryoprotectiveeffectoftrehalosebineda公司产品，海藻糖

6、为上海试剂二厂产品。程控降温仪由中国军事医学科学院生产。XTU10C光学显微镜为上海豫光仪器有限公司产品，JSM840扫描电镜、JEM1200EX透射电镜为日本JEOL公司产品。　　1.2方法　　1.2.1取材　　空气栓塞处死兔后开胸,无菌操作取带瓣主动脉,用Hank液洗去残血,修剪。每只兔的主动脉分3段，共48个标本,随机分为新鲜组、对照组(单独使用DMSO)、实验组1（单独使用海藻糖）、实验组2(使用DMSO加海藻糖)，每组12个标本。　　1.2.2保存方法　　无菌条件下将材料置于冻存管内,首先在4℃冰箱平衡20min,放入程控

7、降温仪(Cryo2CylLP,FormaScientific)用两步法降温:1℃/min降温至-30℃,再以5～10℃/min降温至-80℃,移入液氮贮存冰(CRYOPLUS2,FormaScientific)。分别在6、9、12个月后复温检测。各组冷冻保护液成分如下。对照组:0.1mol/LDMSO,RPMI1640,体积分数0.10胎牛血清,青霉素和链霉素各105U/L。实验组1:0.1mol/L海藻糖,RPMI1640,体积分数0.10胎牛血清,青霉素和链霉素各105U/L。实验组2:0.1mol/L海藻糖,0.1mol/LDMSO

8、,RPMI1640,体积分数0.10胎牛血清,青霉素和链霉素各105U/L。　　1.2.3解冻及漂洗　　从液氮中取出带瓣膜动脉,去掉布袋检查外层冷冻袋无破损后立即浸入40℃温水中。待营养液解冻