脱细胞处理对猪主动脉瓣与同种瓣组织构成及免疫差异的影响

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1、2011;31(12)南方医科大学学报（JSouthMedUniv）·2039··基础研究·脱细胞处理对猪主动脉瓣与同种瓣组织构成及免疫差异的影响12简旭华，林秋雄12广东省心血管病研究所/广东省人民医院/广东省医学科学院心外科，医学研究中心，广东广州510080摘要：目的研究脱细胞前后猪主动脉瓣瓣膜与人同种主动脉瓣的组织构成及免疫差异，探讨清除猪主动脉瓣异种抗原的方法。方法选购液氮冻存人主动脉瓣3条，猪主动脉瓣（液氮保存）4条，使用胰蛋白酶脱细胞处理，制作脱细胞瓣膜支架，分同种瓣-同种瓣脱细胞-猪主动脉瓣-猪主动脉瓣脱细胞4组，提取瓣膜蛋白，使用SDS-PAGE电泳法分析各组蛋白构成；

2、使用各组蛋白提取物诱导U-937细胞移动，测定细胞移动量，分析瓣膜支架存在的免疫原性。结果胰蛋白酶可有效清除瓣膜细胞。SDS-PAGE蛋白电泳显示，猪主动脉瓣叶成分较同种主动脉瓣叶蛋白组成存在明显差异。脱细胞处理可显著减小猪主动脉瓣与脱细胞同种瓣的差异，但在26000~43000之间猪主动脉瓣叶蛋白组分仍明显较同种主动脉瓣叶条带多。U-937细胞移动实验显示脱细胞处理可明显减少细胞移动量，但比较脱细胞同种瓣，脱细胞猪主动脉瓣诱导细胞移动量较多（P<0.05）。结论胰蛋白酶脱细胞处理可降低猪主动脉瓣及同种瓣免疫原性。脱细胞处理后的瓣膜支架存在一定抗原性，其中以猪主动脉瓣脱细胞后抗原性仍较强

3、。关键词：瓣膜；脱细胞处理；免疫中图分类号：R654.2文献标志码：A文章编号：1673-4254（2011）12-2039-04EffectofdecellularizationontissuecompositionandimmunogenicityofporcineandhumanaorticvalvesJIANXu-hua1,LINQiu-xiong21DepartmentofCardiovascularSurgery,2MedicalResearchCenter,GuangdongProvincialCardiovascularInstitute,GuangdongGeneral

4、Hospital,GuangdongAcademyofMedicalSciences,Guangzhou510080,ChinaAbstract:ObjectiveTostudythechangesoftissuecompositionandimmunogenicityofporcineandhumanaorticvalvesafterdecellularization.MethodsThreecryopreservedhumanaorticvalvesand4porcinevalvesweredecellularizedwithtrypsin,andtheleaflettissuewa

5、shomogenizedforSDS-PAGEproteinelectrophoresisandU-937migrationassay.ResultsTrypsineffectivelyremovedthecellsfromthevalve.SDS-PAGEdemonstratedanobviousdifferenceinthetissuecompositionbetweenporcineandhumanvalves.Althoughdecellularizationsignificantlydiminishedthedifferencesbetweenthevalves,decellu

6、larizedprocineaorticvalvestilledcontainedmoreproteincomponents(between26000and43000)thanhumanvalve.U-937migrationassayshowedanobviousdecreaseofcellmigrationinthevalvesbydecellularization(from832.7×103to152.4±31.1×103forporcinevalves,P<0.01,andfrom644.9×103to91.2×103forthehumanvalves,P<0.01).Decel

7、lularizedporcinevalvesinducedasignificantlygreatercellmigrationthandecellularizedhumanvalves(P<0.05).ConclusionDecellularizationwithtrypsincaneffectivelydecreasetheimmunogenicityofhumanorporcineheartvalve,butcannotcomp