阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究

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1、阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究作者：吴创鸿陆坚邓启文张扣兴【摘要】目的了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制。方法收集临床分离的阴沟肠杆菌45株，采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因，大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位，琼脂对倍稀释法进行药物敏感性检测。结果45株阴沟肠杆菌中，7株PCR法及测序证实为qnrA基因。7株菌中6株菌所携质粒被成功提取并进行Southern杂交，qnrA基因定位于80～200kb大小

2、的低拷贝数天然质粒上。4株菌成功进行接合传递试验，使接合子对环丙沙星的MIC值提高了32～64倍。结论质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA在深圳地区阴沟肠杆菌中具有较高的流行率，可能是导致阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药获得性耐药的重要原因。【关键词】qnrA基因阴沟肠杆菌喹诺酮耐药质粒PlasmidmediatedquinoloneresistanceinclinicalisolatesABSTRACTObjectiveToinvestigatetheprevalenceandlocationofqnrAge

3、neinclinicalisolatesofEnterobactercloacaeanditsfunctioninthedevelopmentofquinoloneresistance.MethodFortyfiveEnterobactercloacaeedidextractionandSouthernhybridizationinethelocationofqnrA.Conjugationexperimentsinethetransferabilityanditseffectsinthedevelo

4、pmentofquinoloneresistance.ResultsqnrAatchedthatofNCBIGenBankidextractionandSouthernhybridizationidsinsizeof80～200kb.ConjugationexperimentsidmediatedquinoloneresistanceassociatedShenzhencityandmaycontributetothequinoloneresistanceofthiesebacteria.KEYart

5、inez等首次证实肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗菌药存在质粒介导的耐药机制，并将该耐药基因命名为qnr(现命名为qnrA)［1］。之后我国学者王明贵等研究发现qnrA基因在耐喹诺酮类抗菌药大肠埃希菌中的检出率高达7.7%，提示qnrA基因在介导肠杆菌科细菌耐药机制方面可能发挥着重要作用，引起广泛关注［2］。目前阴沟肠杆菌已成为医院内感染的重要病原菌，且对喹诺酮类抗菌药的耐药性迅速上升，给临床抗感染治疗带来严峻挑战［3，4］。为了解qnrA基因在介导阴沟肠杆菌耐药性播散方面的作用，本研究采用PCR技术对2004

6、～2005年我院临床分离的阴沟肠杆菌进行了qnrA基因携带率的筛查，DNA测序证实并与已报道的qnrA序列进行比较，并通过Southern杂交及接合传递试验对qnrA基因进行了质粒定位，现报道如下。1材料和方法1.1菌株来源及鉴定2003～2004年我院及深圳市人民医院临床分离的非重复阴沟肠杆菌45株。采用法国BioMerieux公司API20E系统进行种属鉴定。研究用菌株为E.coliJ53/pMG252作为qnrA基因PCR检测和Southern杂交检测的阳性质控株，E.coliJ53Azr(耐叠

7、氮钠)作为接合传递实验受体菌及MICs参照株，均由美国Jacoby教授提供。1.2抗菌药物敏感性检测采用琼脂稀释法检测临床分离菌及接合子对环丙沙星的MICs值，其它抗菌药物的敏感性采用KB法检测。MH培养基和药敏纸片均为Oxoid公司产品。结果按照美国临床和实验室标准委员会(CLSI)2005年版推荐的标准进行解释。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和阴沟肠杆菌ATCC13047。1.3qnrA扩增和测序采用PCR法并结合测序进行PCR引物参照【参考