质粒介导喹诺酮耐药基因在大肠杆菌中的研究

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1、温州医学院硕士学位论文质粒介导喹诺酮耐药基因在大肠杆菌中的研究姓名：侯佳惠申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：周铁丽2012-05-12温州医学院硕士学位论文大肠埃希菌质粒介导喹喏酮耐药基因特性研究中文摘要目的1．了解温州医学院附属第一医院2009年至2011年大肠埃希菌的分布及耐药变迁情况，为临床合理使用抗菌药提供理论依据。2．了解质粒介导喹喏酮耐药(PMQR)基因的分布情况，对PMQR基因的周围结构及水解底物的特性进行探讨，并对检出PMQR基因的耐药质粒进行质粒分型。3．对检出率较高的年份菌株进行流行病学的调查研究。方法1．凹顾性调查2009年至2011年年连续分离的大肠埃希

2、菌的分布情况及感染特性，统计分析大肠埃希茵对常用抗茵药物的耐药谱。2．PCR检测PMQR(qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)一Ib及qepA)基因并测序，对PMQR阳性的细菌进行接合转移试验以确证质粒的可转移性，检测接合子的最低抑菌浓度(MIC)，并研究接合子中PMQR基因的周围结构及质粒分型。3．脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析部分细菌的同源性对PMQR基因检出率较高的细菌进行流行病学的调查。结果1．2009年至2011年分离的472株大肠埃希菌中，49％的菌株来自尿液标本，其次为血液、痰液、脓液等。大肠埃希菌对氨苄两林的敏感率最低，其次为头孢唑啉，之后依次是头孢匹美，头孢他啶，左

3、氧氟沙星，庆大霉素，阿米卡星，哌拉两林和亚胺培南，亚胺培南的敏感率最高，达100％。2．472株大肠埃希菌中，检得qnr基因阳性株36株，其中qnrA6株，经测序菌为qnrAl型，qnrSl6株，均为qnrSl型，qnrBl4株，包括2株qnrB2，4株qnrB4和8株qnrB6：142株aac(6’)一Ib阳性株测序成功120株，其中经典型66株，Cr亚型46株，其他突变8株。3．含qnrS基因的接合子对喹喏酮类药物的水解能力略高于qnrB基因，各喹喏酮类药物之间耐药性则无明显差异，aac(6’)-Ib-cr只对环丙沙星和诺氟沙星有作用，对左氧氟沙星则无影响。PMQR基因可降低喹喏酮类药物

4、的敏感性，但均达不到临床耐药水平。4．75株接合子中扩增出整合酶60株，常见ESBLs基因(TEM、SHV、CTX—M一1和CTX．M一9)阳性57株。这些接合子中的质粒主要属于IncF、IncL／M、IncI和Incttll家族。5．对2009年56株aac(6’)．Ib阳性的大肠埃希菌进行同源性分析，有两株为温州医学院硕士学位论文同一型，其亲缘关系相近，另有两组亲缘关系可能相近的菌株(每组各3株)。结论1．临床分离大肠埃希菌主要引起泌尿道感染，其次是血液感染，对氨苄两林的敏感性最低，对亚胺培南的敏感性最高。2．472株大肠埃希茵的PMQR基因中aac(6’)．Ib的检出较qnr基因略高，

5、qnrS基因对环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的水解力略高于qnrB基因，各喹喏酮类药物之间的耐药性则无明显差异，而gag(6’)-Ib-cr只能使环丙沙星和诺氟沙星的敏感性降低。3．PMQR基因常与ESBLs基因一起位于整合子中，且多位于IncF、IncL／M、IncI和IncHIl型质粒中。4．脉冲场凝胶电泳结果显示，本院2009年大肠埃希菌主要呈散发流行趋势，也存在小范围的克隆播散，应引起临床注意，防止医院患者之间的交叉感染。关键词大肠埃希菌：耐药性；MIC；质粒；喹诺酮类：qnr；aac(6，舶一CF；；PMQR4温州医学院硕士学位论文英文摘要Studyontheplasmid--me

6、diatedquinoloneresistancegeneinEscherichiacoliclinicalisolatesAbstractobject1．ToinvestigatethedistributionanddrugresistanceinclinicalisolatesofEscherichiacoliintheFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalCollegefrom2009to2011．2．Toresearchthedistributionofplasmid-mediatedquinoloneresistance(PMQR)andit

7、srelationshipwithquinoloneresistanceinconsecutiveclinicalisolatesofEscherichiacoli．Geneticanalysisofplasmid-mediatesquinoloneresistance(PMQR)andtheplasmidstypingwerealsostudied．3．MolecularepidemiologyoftheE