禽源大肠杆菌质粒介导氟喹诺酮类耐药基因的检测及中药消除耐药性研究

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1、分类号学号ＭＺ１２５０４ＵＤＣ密级壤‘义聲叫眶真ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ項去学隹冷文（专业型）禽源大肠杆菌质粒介导氣惶诺？类耐药基因的检测及中药消除耐药性硏究李據２２５００９指导教师姓名，扬州大学，江苏扬州，：王志强教受申请学位级别：硕击学科专业名称：兽医硕去论文提交日期：２０１５年６月论文答辩日期：２０１５年６月５曰学位授予单位：扬州大学学位授予日期：２０１５年６月３０日答辩委员会主席：高玉时研究员２０１５年６月禽源大肠杆

2、菌质粒介导氣喧诺砸类耐药基因的检测及中药消除耐药性硏究ｄ－ＳｔｕｄｏｎｔｈｅｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｌａｓｍｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｆｌｕｏｒｏｕｉｎｏｌｏｎｅｙｐｑｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｉｎａｖｉａｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｓａｎｄｔｈｅｇｄｒｕ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｅｆｆｅｃｔｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｇｇｍｅｄｉｃｉｎｅ硏究生：李栋专业：兽医硕±导师：王志强教授扬州大学兽医学院２０１５年６月

3、舍源大肠杆菌质粒介导氣嗟诺爾类耐药基因的检测及中巧消除耐药性研究１中文摘要目前已报道的哇诺酬类耐药机制有多种，其中由质粒介导的耐药机制合理地解释了细菌耐药性的高突变率及多种抗生素的耐药相关性。质粒上携带的耐药基因只介导细菌对哇诺酬类药物的低水平耐药，但是能够诱导飽位基因突变，引起高水平耐药。因此，国内外研究者一直在积极寻找能够消除细菌耐药性的方法。中药因其天然环保、副作用小、应用。安全等优点，受到了研究者的青睐本研究采用ＰＣＲ扩増技术对８３株窝源大肠杆菌进行质粒介导的哇诺剛类耐药（ＰＭＱ

4、Ｒ）基因的检测，同时微量肉汤稀释法测定恩诺沙星（ＥＮＲ）的最小抑菌浓度。对其中６株大肠巧菌进行１０味中药的抑茵试验，选取五味子、黄连、黄岑３味中药对６株耐药菌进行消除培养，筛选雑除茵并通过抑菌试验及ＰＣＲ方法确定耐药性及耐药基因的消－Ｒ分析消除前后耐除情况，同时ＲＴｑＰＣ药基因表达量的变化。研巧结果如下：８３ＰＭ－－株禽源大肠杆菌ＱＲ基因检出率为８６．７％（ｇｗ、ａａｃ（６９化ｃｒ、００ｘ４５分别为〇％４９．４／〇、８３．１、９．６％，未检出ｇｗＣ和ｇｅ如基因）。ＰＭＱＲ基因在禽源大肠杆菌中具有很高

5、的流行率。抑菌试验显示有５０株大肠杆菌对ＥＮＲ耐药，占全部菌株的比例为６０％。说明本研究中禽源大肠杆菌对哇诺砸类药物的耐药情况严重。１０种中药中山植、五倍子、金银花、黄拍、鱼腥草的抑菌效果不明显，艾叶和连翅抑、、、、菌效果相对较好，五味子黄连黄《的抑菌效果最好。高中低剂量的五味子、黄连、６－黄《提取液对株大肠杆菌的耐药性消除率在０１００％之间，高剂量纪的消除效果最好。说明中药具有消除耐药性的作用而且存在完全消除的可能一。进步研巧发现，中药也具有消。除耐药基因的作用，黄连对耐药基因的消除率最高可达１００％

6、不过不同中药和不同菌株间的消除效果有差异一，而且并不都是高剂量组消除效果最好。阳性对照ＳＤＳ对某基因的消除率因菌株的不同有差异－ＰＣＲ结果显示３ｍＲＮＡ。ＲＴｑ味中药消除培养后，耐药基因表达量均下降，表明耐药基因ｍＲＮＡ表达水平与细菌耐药的强度有关。关键词：禽源大肠杆菌；质粒介导的憧诺爾类耐药基因；ＭＩＣ；中药，耐药性消除ｎ扬州大学硕去学位论文ＡＢＳＴＲＡＣＴ＾Ｒｅｓ－ｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｉｎｐｌａｓｍｉｄｓｕ巧ｒｏｖｉｄｅｌｏｗｌｅｖｅｌｉｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｕｔｔｈｅｃａｎｉｎ

7、ｄｕｃｅｔｈｅｇｊｐ，ｙｔａｒｅ－ｉｉ－ｅａｎｃｒｅｓｅａｒｃａｅｒｌｄｍｕｔａｔｉｏｎｏｆｔｇｅｎｅｓｗｔｈｈｇｈｌｅｖｌｒｅｓｉｓｔｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｈｅｒｓｌｌｏｖｅｒｔｈｗｏｇ，ｈａｖｅｂｅｅｎａｃｔｉｖｅｌｙｌｏｏｋｉｎｇｆｏｒｍｅｔｈｏｄｓ化ｅｌｉｍｉｎａｔｅｂａｃｔｅｒｉａｌ＾ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｒａｄｉｔｉｏ打ａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｗｈｉｃｈｈａｖｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎａｔｕｒｅｆ

8、ｅｗｅｒｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｓａｆｅｔ，ａｎｄｙ泣ｐｐｌｉｃｓｔｉｏｎａｒｃｆｅｖｏｒｃｄｂｙｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ．－ｎｄＰＣ民ｗａｓｕｓｅｄ化ｄｅｔｅｃｔｐｌａｓｍｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｑｕｉｎｏｌｏｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＰＭ