PCRSSCP在淋球菌氟喹诺酮耐药基因突变研究中的应用

《PCRSSCP在淋球菌氟喹诺酮耐药基因突变研究中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、原创性声明本人声明;所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本了承担。学位论文作者签名:-}'l谈艇关于论文使用授权的说明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意学校及国家有关机构可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其复制手段保存论文。论文作者签名:、。沃婉，旨导教师签名:A-r-;P日期:-00三年四月日期:

2、-00三年四月吉林大学硕士学位论文提要目的:探讨用PCR-SSCP方法检测淋球菌氟哇诺酮耐药基因突变的研究。方法:自行设计gyrA基因特异性扩增引物，运用PCR-SSCP银染色方法检测基因突变。结果:在30例淋球菌临床分离株中选取13例，对其gyrA基因342bp扩增产物进行DNA序列测定，其91位和95位位点发生突变。结论:通过本研究所使用PCR-SSCP的方法检测临床分离出的淋球菌是否对氟哇诺酮耐药，并通过序列分析了解到淋球菌耐药基因突变以gyrA基因编码91位及95位点的氨基酸的碱基突变为主。通过此方法可以早期、准确、快速地检测出从临床获得的淋球菌菌株是否对氟哇诺酮耐药，从而指

3、导临床用药及治疗。关键词:氟哇诺酮耐药淋病奈瑟氏球菌聚合酶链式反应单链构象多态分析gyrA基因吉林大学硕士学位论文英文缩写词bybasepair碱基对2'-deoxyguanosinetriphosphate脱氧鸟普三磷酸dNTPsdeoxyrinucleotidetriphosphate脱氧胸昔三磷酸ethylenediamineltetraaceticacid乙二胺四乙酸二钠EBethidiumbromide澳乙锭FQNLfluoroquinolones氟哇诺酮类lineprobeassay多列探针检测PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应QRDRsQ

4、uinoloneresistancedetermineregions喳诺酮耐药决定区N,N,N',N'-tetramethylethylethylenediaminez吉林大学硕士学位论文四甲基乙二胺TBEtris-borate-EDTATris-硼酸缓冲液SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠singlestrandconformationpolymorphism单链构象多态性分析吉林大学硕士学位论文前言淋病是世界范围内发病人数较多的性传播疾病(STD)之一，特别是在发展中国家，淋病仍然是最常见的STD}''2}。随着改革开放，淋病在我国也开始并持续流行。据全

5、国性病防治中心报道，到1987年10月止，全国21个省市自治区发现的4万多例STD中，淋病病例占77.67%Pl。至今，据有关专家(叶顺章等)估计STD的实际发病人数已经超过400万，淋病仍然是主要病种，由于其它性病发病人数的增加，使淋病在整个性病病人中的比例有所下降(已由1991年的65.2%下降到2000年33.3%)，但淋病患者的总人数却由11.4万上升到28.6万，发病率也由10.09/10万人上升到22.92/10万人。由此可见，淋球菌耐药问题已受到普遍关注，其耐药情况在不同时期及不同地区不尽相同。我国自1987年开始监测淋球菌的耐药情况，许多学者相继对不同地区的淋球菌耐药

6、情况作了研究和分析。例如在产青霉素酶的淋球菌菌株(PPNG)出现之前，青霉素曾被认为是治疗淋病的经典药物。但随着PPNG的出现，其应用受到了限制。随之临床又相继应用四环素、壮观霉素、氟喳诺酮类、头袍三漆等广谱抗菌素治疗淋病，都出现了相应的耐药现象。因此淋球菌的耐药性是一个发展的过程。如何早期了解淋球菌的耐药性，对于控制疾病的传播是至关重要的因素。国内外的医务工作者一直至力于早期诊断耐药性的研究。淋球菌产生耐药性的原因是多方面的也是复杂的。检测早期耐吉林大学硕十学位论文药性的方法是至关重要的。它直接关系着临床用药原则及对耐药菌株的控制。以往的检测方法如药敏纸片法，试验耗时长，从培养菌株

7、到最终获得药敏结果需要1周的时间，且准确性和灵敏度都较差，不能对早期耐药进行检测，加之仪器设备及试剂昂贵、费用高，限制了临床广泛应用。目前抗生素仍是治疗淋病的主要药物，但由于我国治疗性病的医疗市场很不规范，致使淋球菌耐药菌株增多，耐药菌株的产生和播散严重影响着淋病的控制，成为发展中国家和发达国家控制性病传播工作的重点，对淋球菌耐药分子机制的研究有助于用药原则的选定和规范用药，并注意识别和监测对该类药物的耐药株的出现和传播。氟奎诺酮类(FQNL)药物为广谱、