枸橼酸杆菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制及流行特性研究

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1、温州医学院硕士学位论文枸橼酸杆菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制及流行特性研究姓名：吴玲剑申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：周铁丽2012-05温州医学院硕士学位论文枸橼酸杆菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制及流行特性研究摘要目的1．了解温州医学院附属第一医院2007年"-2011年间临床分离的枸橼酸杆菌分布情况及耐药特性，为临床抗菌药物的选择提供依据。2．研究不依赖耐药背景的枸橼酸杆菌临床连续分离株中质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)的分布及其阳性株的质粒特性和流行播散情况，为临床耐药株的监控提供依据。3．研究质粒介导的喹诺酮类耐药基因与超广谱p一内酰胺酶(ESBLs)、质粒型hmpC酶

2、基因携带率的相关性，分析其与不同抗菌药物耐药性的关系。方法1．回顾性调查2007年---2011年间临床分离枸橼酸杆菌的感染分布特点，分析其耐药性。2．PCR筛选枸橼酸杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr，aac(6’)一Ib—cr，qepA)，qnr基因阳性产物进行DNA测序以确定其基因型，同时检测ESBLs、AmpC基因。3．选取43株PMQR基因阳性的菌株进行接合转移试验，探讨质粒介导的喹诺酮类耐药基因的可转移性，接合子的耐药基因通过PCR验证，琼脂稀释法检测供体菌、受体菌及接合子MIC，分析耐药基因与耐药性的关系。4．选取13株qnrB阳性枸橼酸杆菌，利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE

3、)来分析同源性及流行播散情况。结果1．本研究5年间共收集枸橼酸杆菌147株，其中弗氏枸橼酸杆菌最多(107株，占72．8％)，其次为克氏枸橼酸杆菌(28株，占19．0％)。标本来源以尿液标本最多(54株，占36．7％)，其次为痰液和血液。临床常用的抗菌药物中，敏感性最好的是亚胺培南，147株中仅有4株耐药，敏感率为97．3％；其次是哌拉西林／他唑巴坦及头孢哌酮／舒巴坦，敏感率分别为81．6％和78．3％。耐药率最高是氨苄西林，达97．3％；其次是头孢唑啉(74．1％)。2．101株枸橼酸杆菌中共有43株检出携带PMQR基因，其中6株同时携带两种基因，qnr基因阳性菌株33株，其中qnrA、qn

4、rB、qnrS基因分别检出1株、22株、10株，aac(6’)一Ib—cr检出16株。qnr基因基因型温州医学院硕士学位论文包括qnrSl、qnrB8、qnrB9、qnrBll、qnrBl7、qnrBl8、qnrB24、qnrB29和qnrAl；所测得序列与GenBank中已经登录的qnr基因家族序列100％同源，突变株未见。未检出qnrC、qnrD、qepA基因。3．43株PMQR基因阳性菌株中12株同时携带ESBLs基因、37株同时携带AmpC基因，而58株PMQR基因阴性菌株中17株携带ESBLs基因、50株携带AmpC基因，两者无显著性差异(P>0．05)。PMQR基因阳性和阴性株菌对

5、喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药率存在显著性差异(P<0．01)，而对三代头孢菌素耐药率无统计学差异。4．43株PMQR基因阳性菌株中有19株接合转移试验成功，接合子对多类抗菌药物的MIC均有不同程度的提升。特异性PCR证实了接合子和供体菌有着相同的耐药基因。5．选取13株qnrB阳性的枸橼酸杆菌利用PFGE技术分析同源性，发现仅两株有同源性，而大多呈散发流行趋势。结论2．3．4．0．关键词临床分离的枸橼酸杆菌耐药较严重，仅对少数抗菌药物有较高的敏感性，其中亚胺培南敏感性最高，哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦的敏感性亦较高，可作为临床枸橼酸杆菌感染的首选。PMQR基因检测显示：本批枸橼酸杆菌以携

6、带qnr基因为主，其次为aac(6’)一Ib—cr基因，未检出qepA基因。PMQR基因阳性菌株与PMQR基因阴性菌株ESBLs、AmpC基因携带率无统计学差异。接合转移实验结果显示，PMQR基因可以通过其所在的质粒进行水平转移从而增加细菌的耐药率。携带qnrB基因的枸橼酸杆菌大多无同源性，呈散发流行趋势。枸橼酸杆菌；耐药性；喹诺酮；质粒；MIC；qnr；aac(6’)一Ib—cr；qepA；PMQR；接合转移试验；PFGE4温州医学院硕士学位论文ResearchonPrevalenceFeatureandAntibioticResistanceMechanismsofCitrobactera

7、gainstQuinoloneAbstractobjective1．ToinvestigatethedistributionanddrugresistanceofCitrobacterwhichisisolatedfromtheFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalCollegefrom2007to2011．ItWaSexpectedtoprovidesom