脂肪源性干细胞体外成骨特性的研究

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1、脂肪源性干细胞体外成骨特性的研究作者：李俊刚，王万明，孙效棠【摘要】　　目的探讨兔脂肪源性干细胞体外成骨分化能力。方法取3个月龄新西兰白兔颈背部皮下脂肪组织，Ⅰ型胶原酶消化获得细胞。绘制细胞生长曲线，采用免疫细胞荧光法检测细胞表面抗原CD44、CD45；分别加入条件培养液对所获得细胞进行成骨成脂诱导，并分别进行形态学、碱性磷酸酶、钙盐沉积和油红O染色相关检测；将脂肪源性干细胞分为成骨诱导组和非成骨诱导组，分别于诱导后1、2、3、4周检测两组的碱性磷酸酶和钙离子浓度并作统计分析。结果a)所获细胞CD44阳性表达，CD45阴性表达；所绘制的生

2、长曲线成典型的“S”型。b)在诱导条件下，碱性磷酸酶及钙盐沉积均呈阳性表达，油红O染色为阳性。c)碱性磷酸酶浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别，在各个时间点诱导组碱性磷酸酶浓度均高于非诱导组(P＜0.05，n＝5)；诱导组碱性磷酸酶浓度在不同诱导时相其浓度变化趋势不同(P＜0.05，n＝5)；钙离子浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别，在各个时间点诱导组钙离子浓度高于非诱导组(P＜0.05，n＝5)。诱导组钙离子浓度在不同诱导时相其浓度变化的趋势不同(P＜0.05，n＝5)。结论脂肪干细胞的易分离培养、增殖快和良好的成骨诱导活性完全

3、符合对种子细胞的要求，是一种理想的骨组织工程种子细胞。【关键词】脂肪源性干细胞；成骨分化；碱性磷酸酶；钙离子　　Abstract：ObjectiveToexplorethedifferentiationofadiposederivedstemcells(ADSCs)fromrabbitsintoosteogeniccellsinvitro.MethodsInthisstudy，ADSCsthenapeofNemunofluorescenceandcellauxodromeedosteogenicandadipogenicdifferen

4、tiationrespectively，folloorphology，alkalinephosphataseassay，VonKossaandrathonumredOstain.ADSCsconcentrationofthesetthecheckesredOstainofADSCsediums.c)Alkalinephosphataseassays(ALP)e(P＜0.05，n＝5)andALPoftheinducedgroupconcentrationconcentrationofinducedgroupse(P＜0.05，n＝5)

5、andcalciumconcentrationoftheinducedgroupakesADSCsidealseedcellsofbonetissueengineering.　　Keycells；osteogenicdifferentiation；alkalinephosphataseassay；calciumion　　脂肪源性干细胞(adiposederivedstemcells，ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。研究发现这些细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有来源丰富、基金项目：南京军区

6、医学科学技术研究“十一五”计划资助项目(06MA137)取材容易、少量组织即可获取大量干细胞、低免疫源性、不涉及道德伦理问题等优点，此外，已证实其具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、心肌细胞、神经细胞和内皮细胞等方向分化的能力［1，2］。因此，ADSCs是一种很有前景的组织工程种子细胞，具有非常重要的研究价值。本实验通过研究兔脂肪干细胞的分离、培养、鉴定以及体外成骨、成脂诱导分化过程，为其能够作为骨组织工程理想的种子细胞提供实验基础。　　1资料与方法　　1.1材料　　3个月龄新西兰白兔(福州总院实验动物中心)，低糖、高糖Dulb

7、eco改良的MEM培养液(dulbeco′smodifildeaglemedium，DMEM)(Gibco公司)，Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶、地塞米松、L抗坏血酸、β甘油磷酸钠、胰岛素、3异丁基1甲基黄嘌呤(3isobutyl1methylxanthine，IBMX)、吲哚美辛、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(Sigma公司)、标准胎牛血清(杭州四季青)，CD44、CD45抗体、正常山羊血清(武汉博士德)，FITC标记羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥)，碱性磷酸酶染色试剂盒、碱性磷酸酶检测试剂盒、钙离子检测试剂盒(南京建成生物制品有

8、限公司)，培养瓶、6孔、12孔及96孔板(Costar公司)。　　1.2方法　　1.2.1ADSCs的原代培养、传代培养　　取3个月龄新西兰白兔，雌雄不限，速眠新0.2～0.3mL/kg肌注麻