脑源性神经营养因子对人脂肪干细胞增殖与成骨分化的作用

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1、京诚如替聲從硕±研究生学位论义纖北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２００４０２２硕±学位论文（专业学位）脑源性神经营养因子对人脂肪干细胞增殖与成骨分化的作用ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＢｒａ－ｉ打ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃＦａｃｔｏｒｏｎｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＯｓｔｅｏｇｅｎｉｃＤ－ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＡｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓ所院：整形外科医院姓

2、名：吴小堇指导教师：杨斌教授导师小组：张智勇教授唐晓军副教授学科专业：外科学研究方向：整形外科完成日期：２０１５年３月目录中１：摘要英文摘要２－前胃４一第章人脂肪干细胞的体外分离培养与生物学特性检测６１．Ｓ的６２．实验材料６３．实验方法８４．结果１１５．１２職６．小结１３第二章脑源性神经营养因子对人脂肪干细胞増殖与成骨分化的作用１４１．目的１４２．实验材料１４３．实验方法１６４．Ｓ２０

3、果５．ｉ寸论２１６．小结２２全文总结２３—论文参考文献２４综述脑源性神经营养因子与骨／牙组织发育代谢２９综述参考文献３６附录１全文图片４１附录２缩写注释４５致谢４６原创性声明４７脑源巧神经营养因子对人脂肪干细胞増殖与成骨分化的作用摘要目的ｘ＂１．了解ＢＤＮＦ高亲和性受体ＴｒｋＢ与低亲和性受体ｐ７５于ｈＡＳＣｓ表达情况。２．明确不同浓度的ＢＤＮＦ对ｈＡＳＣｓ增殖及细胞周期相关基因影响。３．分析不同浓度的ＢＤＮＦ对ｈＡＳＣｓＡＬＰ活性及

4、成骨分化相关基因影响，探讨ＢＤＮＦ＞在ｈＡＳＣｓ成晉分化过程中的作用。方法１．胶原酶消化分离ｈＡＳＣｓ，贴壁培养并传代纯化。对ｈＡＳＣｓ进行流式细胞术检测，，诱导成脂、成骨分化并进行染色，Ｗ对间充质干细胞特性进行鉴定。？２．＞陆受体与７５ＳＣｓ＾１免疫巧光双染法检测化ｐ受体于ｈＡ表达情况。３．Ｗ含不同浓度ＢＤＮＦ的无血清培养基培育ｈＡＳＣｓ，分别于１２ｈ、２４ｈ、４如ＷＭＴＴ法检测ｈＡＳＣｓ增殖能力变化，并于４８ｈ时收集细胞，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测心－６７表达水平。４．Ｗ含不同

5、浓度ＢＤＮＦ的成骨诱导培养基培育ｈＡＳＣｓ，于成骨诱导１４ｄ时检测ｈＡＳＣｓ的ＡＬＰ活性变化，并于成骨诱导３ｄ、１４ｄ时收集细胞，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测成骨标志基因化么心Ａ併Ｗ表达水平。结果１．ｈＡＳＣｓ表达间充质干细胞表面标志，不表达造血干细胞表面标志，在体外经诱导可向成脂、成骨方向分化。？２．ＳＣｓ表达Ｔｒ诚受体检测结果发现Ｍ，但未见明显ｐ７５受体表达。－－３．ＢＤＮＦ可ｈＡＳＣｓ增殖促进，上调ＣＣ、知６７表达，具有浓度依赖性戶＜鮮（０．０巧。４．随ＢＤＮＦ浓ＡＬＰ活性呈ｌＯ

6、Ｏｎｍｌ姐户度増高，下降趋势，Ｗｇ／抑制效果最显著（＜０．０５）。７ｄ时ｄ，／？伽Ｘ么心戶、成骨，心户随浓度增加出现下降庭势成骨１４时；饼Ｗ均随处理浓度増加出现下降．，于ｌＯＯｎｇ／ｍｌ组下降最显著（戸＜００５）。结论采用酶消法与贴壁筛选法纯化细胞可有效分离ｈＡＳＣｓ；高浓度ＢＤＮＦ可促进ｈＡＳＣｓ增殖但抑制其向成骨分化。ＷＢ关键词：人脂肪间充质干细胞；脑源性神经营养因子；成骨分化；化陆受体；Ｐ７５受体１ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＢｒａｎ－ｄｅｒｉｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ

7、ＦａｃｔｏｒｏｎｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＯｓｔｅｏｇｅｎｉｃＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎ－ＡｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｊ們８１．Ｔｏｉ打ｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴｒｋＢｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｐ７５ｒｅｃｅｔｏｒｉｎｐｈＡＳＣｓ．２．ＴｏｄｅｆｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＤＮＦｏ打ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈＡＳＣｓ

8、ａ打ｄｏｎ—－ｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｒｅｌａｔｅｄ呂ｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏ打ｏｆｈＡＳＣｓ．３．ＴｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆＢＤＮＦ０打ｔｈｅＡＬＰａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈＡＳＣｓａｎｄｏｎｂｏｎｅ—ｒｅ