脑源性神经营养因子对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

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1、分类号：S814.1单位代码：10183研究生学号：2015882017密级：公开脑源性神经营养因子对小鼠吉林大学睾丸间质硕士学位论文细胞睾（学术学位）酮分泌脑源性神经营养因子对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响的影响究Theeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcells作者姓名：高珊专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物生殖调控吉指导教师：李纯锦教授林大学培养单位：动物科学学院吉林大者2018年6月学

2、姓名作脑源性神经营养因子对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响Theeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcells作者姓名：高珊专业名称：动物遗传育种与繁殖指导教师：李纯锦教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月5日中文摘要脑源性神经营养因子对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响脑源性神经营养因子的在中枢神经系统和周围神经系统的作用最先被人们广泛地认知，而其在哺乳动物其他组织器官的作用和功能还有待于

3、进一步的探索。而关于BDNF对雄性生殖生理的影响的研究却十分有限，特别是BDNF对雄性睾酮合成的影响还未见报道。本试验目的在于探索BDNF是否对雄性动物睾丸中类固醇激素的合成存在调节的作用，若存在调节作用，并试图进一步阐明其内在的机理。我们的研究发现，添加外源的BDNF能够上调类固醇激素合成相关的基因的表达，从而促进类固醇激素的合成，这些基因主要包括SteroidogenicacuteregμLatoryprotein(Star)，3b-hydroxysteroiddehydrogenase(Hsd3b1)和CytochromeP450s

4、ide-chaincleavageenzyme(Cyp11a1)。结果显示，处理之后上清中的睾酮的含量显著地升高（p<0.05），而Star，Hsd3b1，Cyp11a1的mRNA水平显著升高（p<0.05），Star和Cyp11a1蛋白的水平显著升高（p<0.05）。为了进一步印证BDNF的作用，本试验用RNA干扰的方法，瞬时地将内源的BDNF基因进行敲降，发现BDNF敲降之后，首先显著地降低上清中的睾酮的分泌水平（p<0.05），其次，显著地降低了类固醇激素合成相关基因的表达，结果显示：BDNF，Star，Hsd3b1，Cyp11a1

5、的mRNA水平显著性降低（p<0.05），Star以及Cyp11a1蛋白的水平也显著性降低（p<0.05）。为了阐明BDNF对类固醇激素合成调控的作用机理，我们在外源的BDNF处理和干扰掉内源的BDNF基因之后，均分别检测了MEK-ERK1/2通路的磷酸化的水平变化，通过westernboltting技术检测了关键蛋白ERK1/2的磷酸化水平，结果显示，BDNF蛋白处理24小时之后，ERK1/2的磷酸化水平显著地上升（p<0.05）。而干扰掉内源的BDNF基因之后，ERK1/2的磷酸化水平又显著地下降（p<0.05）。为了进一步印证MEK

6、-ERK1/2通路的激活状态，我们用MEK通路特异性阻断剂PD98059处理了TM3细胞，结果表明，处理之后，首先ERK1/2的磷酸化水I平显著地下降（p<0.05），而上清中的睾酮含量显著地降低（p<0.05）。其次，Star，Hsd3b1，Cyp11a1的mRNA水平显著性降低（p<0.05），而Star和Cyp11a1蛋白的水平也显著性降低（p<0.05）。添加外源的BDNF蛋白的试验中，证明BDNF有促进睾丸间质细胞睾酮合成的作用，而敲降内源的BDNF基因的试验证明，BDNF能够作为一种旁分泌因子对睾酮的合成进行调节。而ERK1/

7、2通路是参与BDNF发挥其调节作用的一条通路。关键词：脑源性神经营养因子，睾丸间质细胞，睾酮，ERK1/2信号通IIAbstractTheeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactoronproliferationandsteriodogenesisofmouseLeydigcellsBrain-derivedneurotrophicfactor(BDNF)wasfirstrecognizedforitsrolesintheperipheralandcentralnervoussystems,andits

8、complexfunctionsonmammalianorganshavebeenextendedconstantly.While,asyet,littleisknownaboutBDNFef