骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用分析

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1、华中科技大学硕士学位论文骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用研究中文摘要目的：探讨骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞（DPSCs）增殖和成骨分化的影响，并对PI3K/Akt通路在其中的作用进行初步研究。方法：1、分离培养大鼠DPSCs并进行鉴定：采用组织块消化法分离获得大鼠牙髓细胞，克隆化分离培养大鼠DPSCs，并采用免疫组织化学方法鉴定其细胞表型。2、检测骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖和成骨分化的作用：实验组用骨碎补总黄酮浓度分别为0.01g/L、0.05g/L和0.1g/L的成骨诱导培养基进行培养，对照组不加入骨碎补总黄酮，仅以成骨诱导培养基为细胞培

2、养体系。分别在诱导培养后第3、5、7和第9天用MTT法检测各组细胞的增殖；培养后第9天检测各组细胞碱性磷酸酶（ALP）水平；第21天茜素红染色法检测钙结节形成情况。3、检测PI3K/Akt通路在骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖及成骨分化作用过程中的活化情况：诱导培养后第9天采用WesternBlot法检测以上各组细胞pAkt的表达。结果：1、分离出的大鼠牙髓细胞体外生长良好，形态多为成纤维细胞样，少量细胞形态不规则；克隆化分离培养出的DPSCs增殖较快，呈集落样生长，细胞排列紧密，随着培养时间的延长，细胞形态逐渐伸展为长梭型；免疫组化结果显示大鼠DPSCs阳性表

3、达CD44及CD29，而CD34呈阴性表达。2、经骨碎补总黄酮浓度分别为0.01g/L、0.05g/L及0.1g/L的诱导培养基作用后，从时间上看，在各检测时间点，各实验组OD490与对照组相比均增加（P<0.05），且0.5g/L组较0.01g/L组的OD490也增加（P<0.05），但0.1g/L组较0.05g/L组OD490增加没有显著性差异（P﹥0.05）；从浓度上看，各实验组第5、7、9天较第3天的OD490均增加（P<0.05），且各实验组OD490时间依赖性增加也有显著性（P<0.05）。各实2华中科技大学硕士学位论文验组细胞ALP活性均高于对照组

4、（P<0.05），且在骨碎补总黄酮浓度为0.01g/L、0.05g/L及0.1g/L时的OD410浓度依赖性增高也有显著性（P<0.05）；实验组钙化能力较对照组增强（P<0.05），且有浓度依赖性（P<0.05）。3、pAkt的蛋白相对表达量随骨碎补总黄酮浓度的增加而升高（P<0.05）。结论：骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖及成骨分化具有促进作用，表现出浓度和时间依赖性，且该作用可能是依赖PI3K/Akt通路所介导的。关键词：牙髓干细胞；骨碎补总黄酮；PI3K/Akt通路；增殖；成骨分化3华中科技大学硕士学位论文Effectsoftotalflavonoid

5、sofdrynariaonproliferationandosteogenicdifferentiationofratdentalpulpstemcellsAbstractObjectives：Toexploretheeffectsoftotalflavonoidsofdrynariaonproliferationandosteogenicdifferentiationofratdentalpulpstemcells(DPSCs),andtoevaluatethepotentialroleofPI3K/Aktpathwayintheaforementionede

6、ffects.Methods：1.Dentalpulpcellswereculturedbyexplantscombinedwithenzymedigestiontechnique.SinglecelllineofDPSCwasisolatedbylimiteddilutionofculturedcellsandidentifiedbyimmunohistochemistry.2.DPSCswereculturedinosteoconductiveculturedmediawithdifferentconcentrationsoftotalflavonoidso

7、fdrynaria(0.01g/L,0.05g/Land0.1g/L).Cellsincontrolgroupwereculturedwithouttotalflavonoidsofdrynaria.Cellproliferationofeachgroupwasassayedat3th,5th,7thand9thdaybyMTT.TheALPactivitiesweretestedafter9days,andformingofcalcifiednodulesofeachgroupwastestedafter3weeks.3.TheexpressionofpAkt

8、ineachgroupw