隐球菌保护性肽表位gmfdglsgv多聚体的免疫原性研究

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1、隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体的免疫原性研究作者：谷明莉，钱琤，周晔，陈波，陈孙孝，邓安梅，仲人前【摘要】　　目的探讨纯化的隐球菌抗原肽GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(CytotoxicTlymphocyte，CTL)免疫应答的能力，为新型隐球菌疫苗的研制打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验，研究纯化的GMFDGLSGV单体、二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性，初步鉴定重组多聚体的免疫原性。结果10例HLAA*0201阳性个体PB

2、MC对八聚体的平均SI为37.4±3.07；增殖反应明显高于四聚体（平均SI为20.1±1.37）、二聚体（平均SI为14.1±1.06）、单体（平均SI为11.4±0.68）以及阴性对照（平均SI为1±0.10）引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在抗原肽诱导的CTL细胞毒活性中，HLAA*0201阳性个体PBMC对八聚体、四聚体、二聚体、单体及阴性对照组均表现不同程度的杀伤活性，平均活性分别为48.1±4.28、23.9±2.20、16.3±1.27、13.1±1.10、1.0±0.1(P<0.01)。结论本研究得到的重组

3、优化八聚体具有较好的免疫原性，能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性，为进一步开发有效的隐球菌疫苗打下了基础。【关键词】结核分枝杆菌多聚体疫苗　　InvestigationofImmunogenicityofMultimerPeptidesfromMtb　　Abstract：ObjectiveToinvestigateimmunogenicityofmultimerpeptidesfrommycobacteriumtuberculosis(Mtb).MethodsCellularproliferationandcytotoxicit

4、yexperimentsedtoevaluatetheimmunogenicityofrebinantmultimerpeptidesfromMtb.ResultsMultimerpeptides(10μΜ)couldstimulateproliferationofperipheralbloodmonocytes(PBMCs)fromallof14HLAA*0201positive(A2+)PPD+healthycandidates,strikinglystrongerthanthoseofsinglepeptide’sandPPD’sg

5、roups(averagestimulationindexas37.4±3.07versus20.1±1.37or14.1±1.06or11.4±0.68or1±0.10,respectively,P<0.01).CTLsinducedbymultimerpeptideserpeptidescouldinduceCTLcytotoxicactivityinallofthe14A2+PPD+healthycandidates,significantlystrongerthansinglepeptide’sandPPD’sgroups(a

6、verageactivityas48.1±8.9%versus23.9±9.2%or16.3±7.8%or13.1±8.4%or1±10%,respectively,P<0.01).ConclusionTherebinantoctamerouspeptidefromMtbcanstimulategreaterproliferationandcytotoxicityofPBMCs,ycobacteriumtuberculosis;multimerpeptide;vaccine　　在隐球菌感染中，隐球菌性脑膜炎的发病率近年来呈现出逐年上升

7、的趋势，且易发于细胞免疫功能受损的人群[1～2]。由于其病状重、病死率高等特点，已引起临床医生的高度重视。在艾滋病患者中，并发新生隐球菌感染率高达30%，是爱滋病患者最主要的死亡原因之一[3]。长期使用糖皮质激素、免疫抑制剂和患癌症的病人隐球菌的感染率也在急速攀升[4]。虽然抗隐球菌的保护性免疫机制目前仍不清楚，但细胞免疫尤其是循环及感染部位的T细胞免疫起重要作用[5～6]。体内持续存在的抗原引起相应的免疫应答而产生的大量抗原特异性T细胞是机体免疫性保护作用的基础。因此PBMCs对隐球菌抗原的应答，可作为研究抗隐球菌保护性免疫的良好模型。H

8、LAA*0201在多数人群中普遍存在，其频率>40%。因此，进行隐球菌抗原HLAA*0201限制性T细胞表位疫苗的研究具有重大的现实意义[7～8]。本研究采用HLAA