qlfatinstl(93-102aa)是隐球菌抗原mp98ctl优势表位

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1、QLFATINSTL(93?102aa)是隐球菌抗原MP98CTL优势表位谷明莉，邓安梅，周晔，陈燕，陈波，仲人前，温海，陈孙孝【摘要】目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA?A*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA?A*0201限制性CD8+CTL表位，经流式细胞术分析各抗原肽与HLA?A*0201的亲合力，经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应，经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性，逐步鉴定MP

2、98的HLA?A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93?102aa)与HLA?A*0201分子具有较高的亲合力，并都能刺激HLA?A*0201阳性个体PBMC增殖，并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3QLFATINSTL(93?102aa)是抗原MP98上HLA?A*0201限制性CD8+CTL的优势表位，可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。【关键词】隐球菌；细胞毒性T细胞；抗原表位　　Abstract：ObjectiveToidentifyHLA?A*0201restricted

3、CD8+CTLepitopesinCryptococcusneoformansMP98.MethodsFirstly,databaseSYFPEITHIansMP98.Secondly,affinityandstabilityofthepredictedpeptidesolecules,andstimulatedPBMCsinhealthydonorstoproliferateandinduceantigenspecificCTLs.Onlypeptide6couldgiveapositiveproliferationr

4、esponseandspecificcytotoxicity.ConclusionPeptide3(QLFATINSTL,93?102aa)istheHLA?A*0201restrictedCD8+CTLepitopeofCryptococcusneoformansMP98,ans;epitope;cytotoxicTlymphocyte　　近年来，隐球菌性脑膜炎的发病率呈明显上升趋势。尤易伴发于HIV/AIDS等免疫缺陷患者。该病治疗困难，治愈率低，已成为这类人群致死的主要原因之一[1～2]。在隐球菌感染的人群中只有免

5、疫力功能较为低下的个体才易于发病，而在机体隐球菌感染中越来越多的研究表明，特异性细胞免疫发挥着重要作用。因此，开发研制新的预防和治疗隐球菌的疫苗，具有重要意义和广泛的应用前景[3]。HLA?A*0201在多数人群中普遍存在，其频率>40%，进行HLA?A*0201限制性CTL表位的研究将更具有现实意义。　　本课题利用生物信息学数据库对隐球菌抗原MP98[4]中可能存在的HLA?A*0201限制性CD8+CTL表位进行初步预测，然后进行抗原肽?HLA分子亲合力和稳定性分析，采用时间分辨荧光法(DELIFA)对抗原肽诱

6、导的细胞增殖反应、CTL细胞毒活性进行研究，逐步鉴定出QLFATINSTL(93?102aa)是隐球菌抗原MP98CTL优势表位。　　1材料和方法　　1.1研究对象10例HLA?A*0201阳性健康志愿者，10例HLA?A*0201阴性健康志愿者，留取外周血10ml，肝素抗凝。　　1．2试剂和材料RNA抽提试剂盒购自Qiagen公司；LPS、人重组IL?2、DMSO、BFA、β2?mg均购自Sigma公司；淋巴细胞分离液LymphoprepTM购自挪威AXIS?SHELD公司；人重组GM?CSF、人重组IL?4购自RD公

7、司；FITC标记的抗?CD3、抗?CD8、抗?HLA．A2流式单克隆抗体均为Caltag公司产品；RPMI1640培养基和胎牛血清购自Gibco公司；时间分辨荧光DELFLA细胞增殖(AD0200)与细胞毒性(AD0116)检测试剂盒均购自PerkinElmer公司；多肽由上海生工生物工程技术有限公司合成；T2细胞株由上海长征医院临床实验诊断科保存。　　1．3主要仪器流式细胞仪(CoulterEPICSXL)；时间分辨荧光检测仪(DELFIA1235，PerkinElmer)。　　1．4HLA分型先以鼠抗人HLA?A2单

8、克隆抗体(BB7．2)进行HLA?A2流式初步筛选，然后再以HLA?A2高分辨SSP?PCR试剂盒进一步确认其HLA?A*0201亚型。　　1.5表位预测和多肽合成应用数据库SYFPEITHI对隐球菌MP98进行HLA?A*0201限制性CTL表位预测，根据多肽上的氨基酸是否为锚定残基、辅助残基或优势残基进行记分，分