qlfatinstl(93102aa)是隐球菌抗原mp98 ctl优势表位

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1、QLFATINSTL(93102aa)是隐球菌抗原MP98CTL优势表位作者：谷明莉，邓安梅，周晔，陈燕，陈波，仲人前，温海，陈孙孝【摘要】目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位，经流式细胞术分析各抗原肽与HLAA*0201的亲合力，经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应，经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性，逐步鉴定MP98的HLAA*0201

2、限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93102aa)与HLAA*0201分子具有较高的亲合力，并都能刺激HLAA*0201阳性个体PBMC增殖，并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3QLFATINSTL(93102aa)是抗原MP98上HLAA*0201限制性CD8+CTL的优势表位，可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。【关键词】隐球菌；细胞毒性T细胞；抗原表位　　Abstract：ObjectiveToidentifyHLAA*0201restrictedCD8+CTLepitopesinCryptococcus

3、neoformansMP98.Methods12Firstly,databaseSYFPEITHIwasappliedtopredictHLAA*0201restrictedCD8+CTLepitopesinCryptococcusneoformansMP98.Secondly,affinityandstabilityofthepredictedpeptideswithT2cellwereassayedbyFACS.Thirdly,cellsproliferationandcytotoxicityinducedbypeptideswereinvest

4、igatedbyDELFIAcellproliferationassayandDELFIAEUTDAcytotoxicitytest,respectively.ResultsPeptide3(QLFATINSTL,93102aa)hadhighaffinitytoHLAA*0201molecules,andstimulatedPBMCsinhealthydonorstoproliferateandinduceantigenspecificCTLs.Onlypeptide6couldgiveapositiveproliferationresponse

5、andspecificcytotoxicity.ConclusionPeptide3(QLFATINSTL,93102aa)istheHLAA*0201restrictedCD8+CTLepitopeofCryptococcusneoformansMP98,whichshowsthatitcanbethecandidateforpeptidebasedvaccine.　　Keywords：Cryptococcusneoformans;epitope;cytotoxicTlymphocyte12　　近年来，隐球菌性脑膜炎的发病率呈明显上升趋势。尤易

6、伴发于HIV/AIDS等免疫缺陷患者。该病治疗困难，治愈率低，已成为这类人群致死的主要原因之一[1～2]。在隐球菌感染的人群中只有免疫力功能较为低下的个体才易于发病，而在机体隐球菌感染中越来越多的研究表明，特异性细胞免疫发挥着重要作用。因此，开发研制新的预防和治疗隐球菌的疫苗，具有重要意义和广泛的应用前景[3]。HLAA*0201在多数人群中普遍存在，其频率>40%，进行HLAA*0201限制性CTL表位的研究将更具有现实意义。　　本课题利用生物信息学数据库对隐球菌抗原MP98[4]中可能存在的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位进行

7、初步预测，然后进行抗原肽HLA分子亲合力和稳定性分析，采用时间分辨荧光法(DELIFA)对抗原肽诱导的细胞增殖反应、CTL细胞毒活性进行研究，逐步鉴定出QLFATINSTL(93102aa)是隐球菌抗原MP98CTL优势表位。　　1材料和方法　　1.1研究对象10例HLAA*0201阳性健康志愿者，10例HLAA*0201阴性健康志愿者，留取外周血10ml，肝素抗凝。　　1．2试剂和材料RNA抽提试剂盒购自Qiagen公司；LPS、人重组IL2、DMSO、BFA、β2mg均购自Sigma公司；淋巴细胞分离液LymphoprepTM购自挪威A

8、XISSHELD公司；人重组GMCSF、人重组IL4购自R&D公司；FITC标记