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1、....页眉单纯疱疹病毒论文：携带HSV-2gBCTL表位的gD抗原制备及其免疫效果评估【中文摘要】单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpessimplexvirus2,HSV-2)为双链DNA病毒,属疱疹病毒科,感染可引起生殖器疱疹。HSV-2感染在全球普遍存在,发展中国家的形势更为严峻。HSV-2还可增加艾滋病和宫颈癌的感染机率。疫苗在预防和治疗HSV-2感染和复发中具有重要的作用。目前的疫苗研制工作主要集中在HSV-2糖蛋白上。HSV-2表面的11种糖蛋白是其主要免疫原,其中的糖蛋白D(glycoproteinD,gD)和糖蛋白B(g
2、lycoproteinB,gB)是亚单位疫苗研究的热点。gD具有高同源性和保守性,是HSV-2最主要的保护性抗原。gB可诱导产生中和抗体并能诱发细胞毒性T细胞反应,CTL表位与MHCⅠ类分子结合,被CD8+....页脚.....页眉T细胞表面受体识别,激发细胞免疫反应,这种免疫反应是抗HSV-2免疫的重要组成部分。本研究将HSV-2主要免疫原gD与gB上两种CTL表位连接构建重组基因gD-gBCTL,分别在杆状病毒表达系统和原核表达系统中进行表达,并对原核表达的重组蛋白的免疫效果进行初步评价。在杆状病毒表达系统中,以构建的重组基
3、因为模板,分别扩增gD基因和gD-gBCTL基因,连接载体pFastBac1构建重组供体质粒,转化DH10BacTM感受态,通过转座获得重组穿梭质粒,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,用获得的两种重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白。经过筛选重组穿梭质粒、优化表达条件,使gD和gD-gBCTL蛋白都得到了较高量的表达,为下一步纯化这两种蛋白,研究它们的免疫效果奠定了基础。在原核表达系统中,构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,HisTra
4、pTMHP柱纯化得到可溶性表达的重组蛋白。将该重组蛋白结合不同佐剂,以不同方式免疫Balb/c小鼠,测定抗体效价,初步评价添加CTL表位后重组蛋白的体液免疫效果,并建立动物攻毒模型,评价重组蛋白的免疫保护性,结果表明该重组蛋白具有较强的免疫保护作用。【英文摘要】HSV-2(Herpessimplexvirus2)isadouble-strandedDNAvirus,itcancausegenitalherpes.HSV-2infectionisprevalentintheglobal,andissevererindevelopi
5、ngcountries.HSV-2canalsoincreasetheprobabilityofAIDSinfectionandcervicalcancer.ThevaccineplaysanimportantroleinthepreventionandtherapyofHSV-2infection.ThecurrentvaccinedevelopmentworksfocusonHSV-2glycoproteins.ElevenkindsofglycoproteinsonHSV-2surfacearethemainimmunog
6、ens,glycoproteinD(gD)andglycoproteinB(gB)arethemostimportantimmunogens.gDisofhighhomologyandconservation,gBcouldinduceneutralizingantibodyandcytotoxicTcellresponses.CTLcanbindwithMHCⅠmoleculetostimulatecellularimmunity,whichisanimportantcomponentoftheimmuneresponsesa
7、gainstHSV-2.Inthisstudy,therecombinantgD-gBCTLgenewasconstructed,....页脚.....页眉whichcontainsHSV-2gDandtwogBCTLepitopes.gD-gBCTLproteinwasexpressedinbothbaculovirusexpressionsystemandtheprokaryoticexpressionsysteminordertoevaluateitsimmuneeffects.Inthebaculovirusexpres
8、sionsystem,gDgeneandgD-gBCTLgenewerebothclonedintopFastBac1vectortoconstructrecombinantplasmids,thenweretransformedintoDH10BacTMtog
