结核杆菌esat-6抗原多表位dna疫苗的制备及其免疫效果的初步研究

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1、南京医科大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩略词英文全称中文名称AmpAmpicillin氨苄青霉素BCGBacillusCalmetteGuerin卡介苗bpbasepair礴，赵蟪ConAConcanavalinA刀豆蛋白ADCDendriticCell树突状细胞DM匣MDulbecco’SmodifiedEagle’SMediumDMEM培养基DMSOdirnethylsulfoxide二甲亚砜dNTPdeoxythymidinetriphosphate三磷酸脱氧核苷EBethidiumbromide溴化乙碇EDTAethylened

2、iaminetetraceticacid乙二胺四乙酸ELISAenzyme—linked酶联免疫吸附实验immunosorbentassayESAT-66kdearlysecrecyantigenictarget6kd早期分泌蛋白FBSfetalbovineseriunl胎牛血清FLfms—liketyrosine1【inase3ligandFlt3配体GFPgreenfluorescenceprotein绿色荧光蛋白GMCsglomerularmesangialcells肾小球系膜细胞脚horseradishpemxidaSe辣根过氧化

3、物酶ODopticaldensity光密度PBSphosphatebufferedsaline磷酸缓冲液PCRpolymerasechainreaction多聚酶链式反应rpmrevolutionsperminute每分钟转速RPMll640RooseveltparkmediumRPMll640培养基TAETris／acetate／EDTA(bafter)"Iris／醋酣EDTA缓冲液南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文结挖j王菌垦§△!二鱼垒麦僮旦丛瘗苴的剑备丞墓鱼瘗夔墨的硒究是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

4、论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：鱼瘗堂作者签名：隘：霞．日期：2避．厶。!三论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：酶．霞导师签名：南京医科大学硕士学位论文中文摘要第一部分结核杆菌ESAT-6抗原多表位I)NA疫

5、苗的构建与体外表达的鉴定目的：构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Flt3配体基因的重组质粒，并使其在大鼠肾小球系膜细胞(aMCs)中表达。方法：用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱，选取3个T细胞表位，并以Ala．Ala-Tyr(AAV)序列作为接头，合成全基因序列，定向克隆入真核双表达载体pIRES及质粒pIRES—FL。在酶切分析与序列测定后，用PEI转染至GMCs细胞，并行Westernblot鉴定其体外表达。结果：核酸序列测定证实重组质粒构建正确，Westemblot证实该重组质粒能在体外GMCs细胞

6、中表达融合蛋白。结论：成功构建了结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因重组质粒。关键词：结核杆菌；ESAT-6；T细胞表位；DNA疫苗南京医科大学硕士学位论文第二部分结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗诱导C57BL／6小鼠免疫应答的初步研究目的：研究结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因及FL胞外段共表达质粒对小鼠的免疫功能的影响。方法：将plRES-TH、pIRES—TH—FL重组质粒免疫小鼠，检测小鼠体内特异性淋巴细胞增殖、Thl与Th2型细胞因子(IFN吖、IL．2、IL．4、IL．10)分泌以及小鼠血清ESAT-6特异性IgG2a、

7、IgGl型抗体的水平。结果：经plRES—TH质粒免疫的小鼠Thl型应答水平上调，Th2型应答水平下降。联合FL基因的plRES．TH．FL重组DNA疫苗免疫效果高于单纯ESAT-6表位的DNA疫苗。结论：结核杆菌ESAT-6表位及FL胞外段共表达质粒能够提高小鼠体内的细胞免疫功能。关键词：结核杆菌；ESAT-6表位；FL；DNA疫苗；细胞免疫3南京医科大学硕士学位论文ABSTRACTConstructionandexpressionofmultiepitopeDNAvaccineonESAT-6antigenofMycobacteriu

8、mtuberculosisinvitroObjective：Toconstructrecombinantplasmidscontaining3TcellepitopesonESAT-6anti