重组埃博拉vlp疫苗制备及免疫效果初步研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：20120010宁夏医科大学硕士研究生学位论文重组埃博拉VLP疫苗制备及免疫效果初步研究PreparationandimmunityefficacyofrecombinantEbolaVLPvaccine学位申请人：任天宇指导教师：王希良申请学位门类级别：医学专业名称：病原生物学研究方向：抗感染免疫所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一五年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’

2、sDegreePreparationandimmunityefficacyofrecombinantEbolaVLPvaccineStudent’sName:TianyuRenSupervisor：XiliangWangSubjectCategory:MedicalMajor:PathogenybiologySpecialty:Anti-infectionimmunizationCollege:SchoolofBasicMedicalSciencesCompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学学位论文独

3、创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名论文导师签名年月日年月』0日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科

4、大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名m彳j论文导师签名一年月日年上月j日宁夏医科大学硕士研究生学位论文摘要重组埃博拉VLP疫苗制备及免疫效果初步研究中文摘要埃博拉病毒病（Ebolavirusdiseases,EVD）是由埃博拉病毒(Ebolavirus)引起的一种高致病性的烈性传染病。致病性最强的扎伊尔型埃博拉病毒（ZaireEbolavirus），致死率

5、可高达90%。埃博拉疫情的爆发对人类产生极大的威胁，但目前仍没有上市的埃博拉疫苗。病毒载体与埃博拉病毒保护性抗原GP蛋白重组的疫苗，如重组水泡口腔炎病毒（VSV）疫苗、重组腺病毒（rADv3，rADv5）疫苗等在灵长类动物中以诱导有效的免疫应答走在前面，而且已完成Ⅰ期临床研究，有效解决了应急需求，但它们均以活病毒为载体，存在潜在的安全性风险，距离正式批准上市仍有一段路要走。病毒样颗粒疫苗（Virus-likeparticles,VLP）是一类具有病毒结构，没有病毒复制能力，较减毒疫苗和以病毒为载体的疫苗更加安全的疫苗

6、种类。以病毒样颗粒形成的疫苗抗原可有效激发免疫应答和免疫保护效果，研发病毒样颗粒疫苗已成为埃博拉疫苗发展的重要方向。埃博拉病毒已被列为生物安全等级4级的病毒，应用埃博拉病原体的操作受到严格的限制和规定。因此阻碍了疫苗研发及其致病机制研究。而近年发展起来的假病毒系统可以模拟埃博拉病毒感染宿主过程，无病毒的致病性，可在中和抗体等多方面替代病毒的使用，在低安全级别的实验室进行操作，为埃博拉疫苗有效性评价提供了保证。目前处于Ⅰ期临床阶段的埃博拉疫苗与现上市疫苗一样，多为有针肌肉注射免疫，存在恐针感、交叉感染、断针等弊端，抗原

7、用量大、免疫保护不全面现实问题。由此，在免疫接种策略上降低抗原用量、诱发全面免疫应答与保护及无针无痛、简便快速、安全高效已成为疫苗研发迫切解决的重大科学问题。随着近年无针注射技术的发展及应用，为发展无针皮内免疫埃博拉疫苗提供了新思路。本研究针对目前流行的扎伊尔型埃博拉病毒疫苗研发的现实需求，采用昆虫表达系统制备ZEBOLA-VLP，通过无针皮内、有针肌肉注射途径分别免疫BALB/c小鼠，并制备重组扎伊尔型埃博拉假病毒用于中和抗体测定，其研究简要报告如下:I宁夏医科大学硕士研究生学位论文摘要一、目的运用Bac-to-B

8、ac昆虫表达系统表达扎伊尔型埃博拉病毒GP+VP40-VLP（ZEBOLA-VLP）疫苗，经皮内、肌肉途径分别免疫小鼠，并以HIV骨架构建扎伊尔型埃博拉病毒囊膜GP蛋白的假病毒，评价免疫效果，为研发ZEBOLA-VLP疫苗提供实验依据。二、方法1、重组ZEBOLA-VLP抗原制备：首先通过VectorNTIAdvanceⅡ系统对扎伊尔型埃博拉病