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时间:2019-03-13
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1、单位代码:84501I学号:m8450112014..,儿1;|硕女#隹讼式I苗国I表达HBsAg重组痘苗病毒I胃小鼠免疫效果初步研究!^||每研究生:臧晚春^制’…培养单位、:中国疾病预防控制中也病毒病所!cnj^导师:陈国敏研究员/9Z已一>#专业:公共卫生;0W82015年I1(4单位代码:8501学号:m84501口014巧女#您俗乂表达HBs乂g重组痘苗病毒小鼠免疫效果初步硏究研究生:减晚春培养单位、:中国疾
2、病预防控制中屯病毒病所导师:陈国敏硏究员专业:公共卫生2015年学位论文原创性、真实性声明本人郑重声明:《表达HBsAg重组癌苗病毒小鼠免疫效果初步研究》是本人在中国疾病预防控制中攻读公共卫生硕去学位期间,在导师指导下完成的公共卫生硕去学位论文。我承诺:本论文中所涉及的所有数据、试验记录k乂及研究结果均真实可信,引用资料已注明出处,无剥窃、篡改、抄袭之行为。如本论文原创性方面出现问题,我應负法律责任。本课题的研究成果归中国疾病硕防控制中所有,发表文章的单位署名为中国疾病预防控制中^:;。特此声明
3、!学位论文作者(签名):研究生导师(签名):201年月日201年月日中国疾病预防控制中也病毒病所硕±学位论文目录摘要1Abstract3英文缩巧词表5mm6实验部分10―、重组质粒的构建和鉴定101.材料及仪器设备101.1粒101.2引物101.3主要试剂101.4主要仪器10212.方法2.1PCR扩増目的片段122.2PCR产物回收(胶回收试剂盒)122.3目的片段01切和连接1312.4连接产物在E.coli
4、DH5a感受态细胞中转化32.5单克隆菌培养13(2.6提取质粒质粒小量提取试剂盒)132.7重组质粒鉴定143.结果153.1PCR扩増目的片段15-3.2重组质粒pSCllS的鉴定15二、表达HBsAg基因的重组MVA构建和鉴定161.材料及仪器设备161、.1病毒细胞和鸡胚161.2引物161.3试剂161.4主要仪器与耗材17中国疾病预防控制中也病毒病所硕±学位论文2.賊18218.1重组MVA构建2.2鸡胚成纤维细胞Chi
5、ckEmbroFibroblast,CEF制备18(y)218.3重组病毒单个蓝斑筛选2.4重组病毒鉴定19219.4.1病毒DNA提取2.4.2PCR扩増202.4.3WesternBlot定HBsA达20鉴g表3.结果22VA-3.1重组MS締选223-.2重组病毒MVAS鉴定223.2.1PCR鉴定22323.2.2WesternBlot鉴定-S在小鼠体内的免疫H、重组病毒MVA24124.欄1.1小鼠免疫物241.2
6、主要试剂24125.3刺激化序列1.4主要仪器及耗材25125.5实验小鼠节谦26226.1免疫物准备2.2小鼠免疫方案292o31.3ELISpt检测细胞免疫应答水平2.4统计分析32333.结果3.1病毒滴度测定结果333.2EUSpot检测特异性细胞免疫应答水平33W论37中国疾病预防控制中也病毒病所硕±学位论文总IS391S4论参考文献42P44iit录文献综述巧作者简介72致谢73中国疾
7、病预防控制中也病毒病所硕±学位论文表达HBsAg重组痘苗病毒小鼠免疫效果初步研究摘要乙型肝炎病毒(HeatitisBvirus,HBV)感染可造成急性或慢性肝脏疾病,p根据世界卫生组织(WorldHeal化Organization,WHO)报告,全球现有2.4化多慢性肝脏感染疾病患者,急性或慢性乙肝可导致每年78万多人死亡,乙肝是全一球最突出的公共卫生问题之。目前使用的慢性乙肝治疗药物主要有IFN、PEG--a。IFNW及核酸类似物等药物药物治疗只能延缓己肝患者肝硬化进展、降低肝癌发生率W及延长生存期,不能
8、彻底清除患者体内病毒,并且药物治疗存在副作用、耐药、长期口服药物患者依从性差等缺点。HBV
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