mers-cov s重组痘苗病毒免疫原性评价及血清抗体检测方法初步探索

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1、单化代码：８４５０１Ｓ．，学号：８４５０１１２０巧．＇－‘ｌ；ｉ，‘硕女＃像讼｜帛Ｓ因７ＭＥＲＳ－ＣｏＶＳ重组痘苗病毒免疫原性评价？艺§病及血清抗体检测方法初步探索Ｉ、ｍ？ｉ防Ｉ控研究生：王平兴貪制培养单位：中国疾控中私病毒病所！ｄｎＩＺ导＂巧：田厚文研究员！副导师：赵莉副硏究员专业：病原生物学２０１５年中国疾＾臟中也病霸彌臟制所硕±学位论文ＭＥＲＳ－ＣｏＶＳ重组痘苗病毒免疫原性评价及血

2、清抗体检测方法初步探索硕±研究生；王平兴导师：田厚文研巧员副导航赵莉副研究员中园疾病预防控制中也病毒病预防控制所冠状病毒巧銷毒相关疾病室Ｉ二零壹五年六月北京中国疾麵臟中備臟制所学位论文原创性、真实性声明－ＣｏＶＭＥＲＳＳ重组痘苗病毒免疫原性本人郑重声明：《评价及血清抗体检、测方法初步探索》是本人在中国疾病预防控制中也《病原生物学》专业攻读硕±学位期间，在导师指导下完成的硕：ｔ学位论文。我承诺；本论文中所涉及的所有数据、试验记录化及研巧

3、结果均真实可信，引用资料已注明出处，无割窃、篡改。，。、抄袭之斤为如本论文原创性方面出现问题我愿负法律责任本课题的研究成果归中国疾病预防控制中也所有，发表文章的单位署名为中国疾病预防控制中必。特此声明！学位论文作者（签名）；研巧生导师（签名）：＾＾ｉｆ、＾＾７ｆ２０１５年日２０１５年叫曰中国赫彌鹏中必病萄商ｉ臟制所目录目录Ｓ录３摘ｇ１Ａｂｓｔｒａｃｔ３英文缩略５前胃７測骑法１３Ｓ果２３一第部分重组痘苗病毒免

4、疫原性的评价２３一重组病毒的构建、２４－－二、重组病毒艮ＷＭＥＲＳＳ１、艮ＷＭＥＲＳＳＱ免疫原性评价２９Ｗ论３４小结３６二－第部分ＭＥＲＳＣｏＶＳＩ抗原的制备及血清学检测方法的初步探索３７一１、Ｓ蛋白的表达与纯化３７二、ＭＥＲＳ＂ＣＶ虹ｄｏｉｒｅｃｔ４０ＥＬＩＳＡ检测方法的初步研究＂ｔｄ＆４２小结４４全５：４５：总结参考文献４６综述５２致？６５个人婦６６中国赫颤鹏中也宿毒麵鹏制所摘要－ＣｏＶＭ

5、ＥＲＳＳ重组痘苗病毒免疫原住评价及血清抗体检测方法初步探索摘要一中东呼吸综合征冠状病毒ＭＥＲＳ－ＣｏＶ是２０１２年从沙特阿拉伯名重症肺（）炎患者体内分离出来的一种新型冠状病毒，感染后主要引起发热、咳嗽、呼吸困难、肌肉酸痛、胸痛等其他胳床症状，最严重的并发症为急性呼吸窘迫和急性肾衰竭０６月１－。截止到２１５年日全球共确诊１１５３例感染ＭＥＲＳＣｏＶ，其中－－包括４３１例死亡病例，病死率为３７％，因此ＭＥＲＳＣｏＶ也是继ＳＡ民ＳＣｏＶ后又一个能够引起人下呼吸道感染的冠

6、状病毒严重危害人类健康。，ＭＥＲＳ－ＣｏＶ在冠状病毒分类上属于２Ｃ中的亚群Ｐ冠状病毒中，在基因分一－型上与Ｂ－ＨＫＵ４ＢｔＣｏＶＨＫＵ５属同ｔＣｏＶ，亚群，是有包膜的单股正链ＲＮＡ病毒－（ｓ化ｅ。ＭＥ民ＳＣｏＶ编码的结构蜜白包括糖刺突蛋白ｐｐｒｏｔｅｉｎ）、核衣壳蛋白（Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ）、膜蛋白（Ｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ）、包膜蛋白－（Ｅｎｖｅｌｐｏｅｒｏｔｅｉｎ。Ｓ蛋白为ＭＥＲＳＣｏＶ特异性糖蛋白，与其他冠状病毒不存ｐ）在交叉反应，是形成

7、冠状突起的主要蛋白；Ｓ蛋白在病毒对宿主细胞的识别及进入细胞的过程中发挥着重要的作用，同时Ｓ蛋白也是诱导机体中和抗体产生Ｓ－ｏＶ的重要範抗原。ＭＥ民Ｃ跨种属及人际间传播的可能性表明，建立特异性Ｓ－ＣｏＶ诊断方法及研制出具有免疫高、灵敏性好、操作简便的ＭＥＲ保护效果好的疫苗－，就成为了控制ＭＥ艮ＳＣｏＶ的关键。－为解决上述问题，本研究Ｗ痘苗病毒天坛株为载体构建分别表这ＭＥＲＳＣｏＶＳｌ、ＳＱ的重组痘苗病毒，评价重组病毒的免疫原性；Ｗ痘苗病毒为载体在原代鸡歴成巧维细胞ｆＥＳ１

8、Ｓ１抗原检测ＭＥＲＳ－Ｉ〇中表达抗原，建立基于ＣｏＶ血清抗体的间接酶联－免疫吸附试验（ｉｎｄｉｒｅｃｔｅｎｚｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｄｅｎｔｙａｓｓａｙ，为诊断试剂及疫苗的研究提供实验依据。主要结果如下：）的方法一第－ｏ、构建了分别表达ＭＥ艮ＳＣＶＳＫＳＱ的重组痘苗病毒，通过ＰＣ民、免疫英光、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对重组病毒鉴定，结果表明Ｓ１、ＳＱ正确插入到痘苗病毒载体中。１中国痴歸５防控中也病客＾陶飾肺摘要Ｓ－ＣｏＶＳ第二对分别