表达小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组非复制型痘苗病毒的构建及鉴定.pdf

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1、生技术通讯LET1TTrERSINBIOTECHN0L0GY⋯Vo1．·25)Nl0．·4斗Ju1L．，20u1I4‘}479doi：l0．3969~．issn．1009—0002．2014．04．006研究报告表达小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子的重组非复制型痘苗病毒的构建及鉴定庞聪，任皎，赵莉，阳静，王平兴，阮力，谭文杰，田厚文中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心，北京102206[摘要]目的：以非复制型痘苗病毒天坛株为载体表达小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)，并体外鉴定其生物学活性。方法：构建含有小鼠GM—CSF的重组痘苗病毒质粒，

2、与非复制型痘苗病毒进行同源重组，筛选表达小鼠GM—CSF的重组痘苗病毒rNTvGMcsFLacz，对目的基因及蛋白的表达进行鉴定，并在体外检测目的蛋白的生物学活性。结果：构建的重组病毒rNTVGMCSFLacZ中正确插入了小鼠GM—CSF基因，Western印迹结果表明其能正确表达GM—CSF，且在体外证明rNTVGMCSFLacZ表达的小鼠GM—CSF能分泌到细胞外，具有生物学活性。结论：构建了一株能分泌表达有生物学活性的小鼠GM—CSF的重组非复制型痘苗病毒。[关键词]小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子；痘苗病毒；非复制[中图分类号]Q78；R392．1[文献标识码]A

3、[文章编号]1009—0002(2014)04—0479—05ConstructionandIdentificationofaRecombinantNon。_ReplicatingVacciniaVirusExpressingMouseGM—CSFPANGCong,RENJiao，ZHAOLi，YANGJing，WANGP，一Xing,RUANLi，TANWen—Jie，TIANHou—WenNationalInstituteforViralDiseaseControlandPrevention，ChinaCDC，Beijing102206，ChinaCorrespond

4、ingauthor．E—mail：houwent@126．corn[Abstract]0bjective：Toexpressmousegranulocytemacrophagecolony—stimulatingfactor(GM—CSF)usingon—rep-licatingvacciniavirusTiantanstrain．andtoidentifyitsbioactivityvitro．Methods：Firstly．arecombinantvac—ciniaplasmindexpressingmouseGM—CSFwasconstructed；thenrNTV

5、GMCSFLacZ．arecombinantvacciniavirusexpressingmouseGM—CSFwasconstructed；lastly，obejectivegeneandproteinexpressionwasidentifiedandthebioactivityofobjectiveproteininvitrowasdetected．Results：ThemouseGM—CSFgenewascorrectlyinsertedin—torNTVGMCSFLacZ，andexpressionofGM—CSFproteinwasidentifiedbyWe

6、sternblot，furthermore，cellsinfect—edwithrNTVGMCSFLacZinvitrosecretedmouseGM—CSFwithbioactivity．Conclusion：Arecombinantnon—repli—catingvacciniavirusexpressingandsecretingmouseGM—CSFwithbioactivitywassuccessfullyconstructed．[Keywords]mousegranulocyte—macrophagecolonystimulatingfactor；vaccin

7、iavirus；non—replicating粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte—毒(HSV)和痘苗病毒的研究也取得较好的治疗效macrophagecolonystimulatingfactor，GM—CSF)是一果，这些研究还进～步提示，免疫治疗效果的提高似种白细胞生长因子，它能刺激干细胞向粒细胞和单乎与表达的GM—CSF本身介导的肿瘤破坏有关。核细胞的方向分化，因此，人们常利用病毒载体表达痘苗病毒表达系统是广泛使用的真核表达系GM—CSF，使其发挥佐剂的作用提高免疫效果，而该统，它有长期人体应用历史，病毒