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《小鼠survivin基因慢病毒表达载体的构建及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、小鼠survivin基因慢病毒表达载体的构建及鉴定杨平，苟欣*，周青松，何卫阳，余昆(重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,中国重庆400016)摘要：应用pLV.Des3d.P/hygro构建小鼠survivin基因的慢病毒表达载体.采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的小鼠survivinmRNA序列进行分析，设计一对survivin基因上下游引物，利用Gateway克隆方法，分别在其两端添加attB重组位点，运用PCR扩增mSurvivin和IRES/EmGFP，将PCR产物进行BP反应然后转化到Stbl3感受态菌，通过卡那霉素抗性筛选、PCR鉴定，选取鉴定正确的p
2、Down-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP克隆测序.将pDown-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP与pLV.Des3d.P/hygro混合进行LR反应，构建慢病毒载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP，再次进行PCR、测序的鉴定.结果显示基因序列克隆正确，成功构建了含有小鼠survivin基因的重组慢病毒表达载体.慢病毒表达载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP构建成功，为下一步研究survivin在间充质干细胞中抗凋亡作用奠定基础.关键词
3、：骨髓间充质干细胞;慢病毒;pLV.Des3d.P/hygro;Survivin中图分类号:Q784文献标识码:AConstructionandIdentificationoflentiviralvectorEncodingSurvivinGeneofMiceYANGPing,GOUXin*,ZHOUQing-song,HEWei-Yang，YUKun(DepartmentofUrology,thefirstAffiliatedhospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)Abstract:ToConstru
4、ctandIdentifythelentiviralvectorencodingsurvivingeneofmicewithclonevectorpLV.Des3d.P/hygro.ByusingOligonucleicacidsoftware,weanalyzethesurvivingenesequenceofmicewhichispublicatedonGenbank.Withgatewayclonemethod,designedacoupleofprimercontainingattBrecombinationsite.mSurvivinandIRES/EmGFPwere
5、obtainedbyPCR,thePCRproductafterBPreactionwastransferedtoStb13,andthecorrectpDown-mSurvivinandpTail-IRES/EmGFPwereselectedbyKanamycinresistanceandPCR.ThelentiviralvectorpLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFPwasobtainedbypDown-mSurvivin,pTail-IRES/EmGFPandpLV.Des3d.P/hygrowithLRreaction.T
6、hroughPCRandsequencing,thelentiviralvectorEncodingSurvivinGeneofMicewasconstructedsuccessfullyandwhichlaysfoundationforthefurtherstudyofsurvivinanti-apoptosisinmesenchymalstemcells.Keywords:mesenchymalstemcells;lentiviralvector;pLV.Des3d.P/hygro;survivinSurvivin基因是近年来发现的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapo
7、ptosisprotein,IAP)家族最小成员,能编码产生一个由142个氨基酸组成的相对分子量为16.5kD的蛋白[1],具有强大的抗凋亡以及调节细胞增殖功能[2]，同时还参与细胞周期调控[3].该蛋白高表达于胚胎组织及各种恶性肿瘤组织，而在成熟组织正常中低表达甚或不表达[4]，表现出随着细胞的增殖分化，survivin表达总体呈现出下降的趋势.间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)具有强大的增殖和多向分化的能力,大量实验研究表明MSCs能定向分化为相应的组织细
