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《FDC-SP_C4orf7基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、FDC-SP/C4orf7基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定向琳】,2,宫苹】，魏娜】・2(1.四川大学华西口腔医学院种植中心，成都610041；2.四川大学口腔疾病研究国家重点实验室，成都610041)摘要：本实验的目的是构建含滤泡树突状细胞分泌蛋白(folliculardendriliccellsecretedprotein,FDC-SP/C4nrt7)基因的过表达慢病毒载体。实验采用PCR技术体外扩增FDC-SP/C4orf7,以细菌内质粒间同源重组的方法构建携带FDC-SP/C4orf7编码区皋因的重组慢病毒载体，并
2、进行酶切及测序鉴定。鉴定正确的克隆转染293T细胞，经WesternBlot检测FDC-SP/C4orf7基因在293T细胞内的瞬时表达。采用脂质体转染法包装产生慢病毒，并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度。结果表明，重组质粒经测序证实，插入片段与FDC-SP/C4orf7基因序列完全一致。WesternBlot印迹证实构建的过表达慢病毒载体中携有正确的FDC・SP/C4orf7皋因，并能在293T细胞中瞬时表达。Realtime定量PCR法检测包装慢病毒滴度为2.00E+08(TU/mL)。木研究成功构建出携带FDC-S
3、P/C4orf7基因的重组慢病毒载体，为进一步研究FDC-SP/C4orf7基因对牙周膜细胞异质性定向表达的调控及相关分子机制奠定了基础。关键词：生物工程；FDC-SP/C4O1T7；慢病毒载体；转染中图分类号：R373ReconstructionandidentificationofrecombinantlentiviralvectorwithFDC-SP/C4orf7XIANGLim,2,GONGPirn,WEINai,2(I.ImplantCenter,WestChinaCollegeofStomatology,Si
4、chuanUniversity,ChengDu610041;2.StateKeyLaboratoryofOralDisease,SichuanUniversity,ChengDu610041)Abstract:Theobjectiveofthisstudyistoconstnictarecombinantlentiviralvectorforfolliculardendriticcellsecretedprotein(FDC-SP/C4orl7).Inthisstudy,alentiviralexpressionvecto
5、rforFDC-SP/C4orf7wasconstructedbyrecombinantDNAtechnique.TheresultinglentiviralvectorcontainingFDC-SP/C4orf7wasconfirmedbyPCRandsequencing・ThegeneratedrecombinantpGC-FU-FDC-SP/C4orI7wastransfectedinto293TcellsandtheexpressingofFDC-SP/C4orf7wasdetectedbyWestern-blo
6、t.Lipofectamine2000-mediatedtransfecionwasusedtoobtainthepackagedlentivirus.Real-timePCRwasusedtodetectthetiterofconcentratedvirus・TheresultsshowedthatFDC-SP/C4ort7wasinsertedintolentiviralvectorpGC-FUaccurately.FDC-SP/C4orf7expressionwasobservedin293TcellsbyWeste
7、rn-blot.Thetiterofconcentratedviruswas2.00E+08(TU/mL).Inconclusion,therecombinantlentiviralvectorpGC-FU-C4orf7canbeconstructedcorrectlyandtransfectedinto293Tcells・Keywords:Bioengineering;FDC-SP/C4orf7;Lentiviralvector;Transfection0引言目前，牙周疾病是引起牙周组织缺损并最终导致牙齿缺失的常见病因2
8、】。近年来，有关牙周病和牙周组织再牛的研究一直是口腔更学的一大热点。牙周膜细胞(periodontalligamentcells,PDLCs)是构成牙周组织的主要细胞，在牙周支持组织的发育、功能和再生中发挥重要作用和研究表明，PDLCs是一个多类型细胞的群体，这些细胞亚群可处于不基金项H：教育部博士点新
