重组白介素_2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：１－４ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ檲檲檲檲殘殘檲檲殘研究论文殘檲檲檲檲重组白介素－２增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究苏春霞１，段相国２，陈溥言３（１．宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系，宁夏银川７５０００４；２．宁夏医科大学检验学院临床免疫学检验系，宁夏银川７５０００４；３．南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京２１００９５）摘要：通过研究重组白细胞介素－２（ＩＬ－２）对口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）多表位疫苗免疫效果的增强作用，为ＩＬ－２作为ＦＭＤＶ表位疫苗佐剂应用

2、提供实验依据。６周龄雌性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，分为４组，第１组联合免疫表达猪ＩＬ－２的重组腺病毒（ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２）和串联表达ＦＭＤＶ多表位基因的重组腺病毒（ｒＡｄ５ＥＧＳ），第２、３和４组分别注射ｒＡｄ５ＥＧＳ、灭活疫苗和ＰＢＳ，间隔２周免疫１次，共免疫３次。首免后每周采血分离小鼠血清，通过ＥＬＩＳＡ检测血清中特异性ＩｇＧ；首免后６周检测血清中抗体亚型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及细胞因子ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达水平，同时分离脾细胞，ＭＴＴ法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示，联合免疫ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２和ｒＡｄ５ＥＧＳ既能增强ｒＡｄ５ＥＧＳ诱导小鼠特异性ＩｇＧ、Ｉ

3、ｇＧ１和ＩｇＧ２ａ的分泌，又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力，且免疫效果强于灭活疫苗；细胞因子检测结果显示，联合免疫ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２后能增强ｒＡｄ５ＥＧＳ诱导小鼠ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的分泌，且其诱导ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组ＩＬ－２能有效增强ＦＭＤＶ多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答，ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２有望作为ＦＭＤＶ表位疫苗的候选佐剂。关键词：口蹄疫病毒；多表位疫苗；佐剂；白细胞介素－２中图分类号：Ｑ８１文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－０００１－０４口蹄疫（Ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈｄｉｓｅａ

4、ｓｅ，ＦＭＤ）是由细胞因子佐剂与ＦＭＤ疫苗联合免疫动物，以增强口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）引起的反刍动物的一种高度传后者的免疫原性。本研究通过联合免疫表达猪ＩＬ－２染性疾病，ＦＭＤ在国际上被称为“政治经济病”，主的重组腺病毒（ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２）和串联表达ＦＭＤＶ多要是因为其传播速度快，防控难度较大，而造成的经表位的重组腺病毒（ｒＡｄ５ＥＧＳ），观察ＩＬ－２对ＦＭＤＶ济损失巨大。目前，疫苗接种仍然是发展中国家控多表位疫苗诱导小鼠免疫功能的影响，为ＩＬ－２作为［１－２］制ＦＭＤ的一项重大策略，但传统的ＦＭＤ疫苗ＦＭＤＶ表位疫苗的候选佐剂提供实验数据。存在不能区分疫

5、苗接种与自然感染以及潜在的生物１材料与方法安全隐患等问题，因此，ＦＭＤ新型疫苗如亚单位疫１．１材料苗、合成肽疫苗、ＤＮＡ疫苗和重组病毒疫苗等被广表达猪ＩＬ－２的重组腺病毒（ｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２）、表达［３－４］泛研究。以往的研究表明，合成肽疫苗或重组蛋ＦＭＤＶ多表位重组腺病毒（ｒＡｄ５ＥＧＳ）、重组ＦＭＤＶ白疫苗能诱导中和抗体的产生并能有效保护病毒对ＶＰ１蛋白由宁夏医科大学病原生物学与免疫学系［５－６］实验动物的攻击，但这些疫苗的免疫原性不如传实验室保存；Ｏ型ＦＭＤ灭活疫苗为中牧股份兰州统灭活疫苗。因此，研究者试图通过增加抗原表位生物药厂产品；ＨＲＰ标记的山

6、羊抗小鼠抗体为的数量或加入Ｔ辅助细胞表位等方法增强新型疫ＣａｌｔａｇＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司产品；细胞因子ＩＬ－４和［７－８］苗的免疫原性。我们前期构建了串联表达ＦＭ－ＩＦＮ－γ检测试剂盒为Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ公司产品；其他试ＤＶ多表位基因，同时引入通用型辅助性Ｔ淋巴细剂均为国产或进口分析纯试剂。［９－１０］胞表位（ＰＡＲＤＥ），但其诱导小鼠抗体水平和细胞免疫应答略低于灭活疫苗。很多研究者试图利用收稿日期：２０１４－０３－０４基金项目：国家自然科学基金项目（３１００１０６４，８１２６０６７８，３１３６０６００）；宁夏自然科学基金项目（ＮＺ１３０６０）；宁

7、夏教育厅高等学校科学研究项目（ＮＧＹ２０１２０６５）作者简介：苏春霞（１９７７－），女，宁夏盐池人，副教授，博士，主要从事分子病毒学与免疫学研究。２动物医学进展２０１４年第３５卷第１２期（总第２５８期）１．２方法见图２。ＩｇＧ抗体亚型检测结果表明，免疫接种后６１．２．１动物的分组与免疫接种６周龄雌性Ｂａｌｂ／周，ｒＡｄ５ＥＧＳ能刺激小鼠抗ＶＰ１特异性ＩｇＧ１和ｃ小鼠分为４组，每组１２只，第１组联合免疫ＩｇＧ２ａ的分泌，与灭活疫苗相比，其诱导小鼠ＩｇＧ２ａｒＡｄ５ｐｏＩＬ－２和ｒＡｄ５ＥＧＳ，第２、３和４组分别注射的分泌水平略高；与单独免疫ｒＡｄ５ＥＧＳ相比，

8、联合ｒＡｄ５ＥＧＳ、灭活疫苗和ＰＢＳ，免疫剂量均为１