hsv2+gd模拟抗原表位、il18重组核酸疫苗的构建与免疫效果观察

《hsv2+gd模拟抗原表位、il18重组核酸疫苗的构建与免疫效果观察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、㈣Y1㈣78嬲HSV乏gD模拟抗原表位、IL．18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察研究生：刘莉专业：病原生物学导师：于爱莲教授王玉副教授中文摘要中又捅斐；霸的根撅前期筛选的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD模拟抗原表位序列P6，．选取与其最相近的天然抗原表位序列NP6(AccessionNumber：E00394)，以pcDNA3．1(一)，为载体、hlL．18为佐剂，分别构建和表达HSVP6和HSVNP6与IL．18不同串联组合的重组表达克隆，并探讨其诱导小鼠机体免疫应答的能力。方法(1)采用串联简并

2、引物PCR法将P6和NP6(与P6最相近的天然抗原表位序列)与hlL一18基因序列分不同组合串联克隆至真核表达载体pcDNA3．1(·)中，构建重组克隆pcI)NA3．1-IL-18一HSVP6、pcDNA3．1一IL一18-HSVNP6、pcDNA3．1-IL-18，并经双酶．切、测序鉴定后将各重组质粒分别转染CHO细胞，通过P6合成多肽免疫家兔阳性血清介导的间接免疫荧光法、Westemblotting检测P6和NP6的表达情况；(2)6周龄雌性BALB／c小鼠随机分为6组(每组10只)，于小鼠双侧股四头肌注

3、射免疫，根据质粒的注射类型不同，各组依次为：1组每侧各注射NS(生理盐水)1001．tl，2组每侧各注射空载体质粒pcDNA3．1100lal(1mg／m1)，3组每侧各注射重组质粒一pcDNA3．1-IL-18100肛l(1mg／m1)，4组每侧各注射P6合成多肽100lal(1mg／m1)，5}纽每侧各注射重组质粒pcDNA3．1．IL．18．HSVP6100pl(1mg／m1)，6组每侧各注射重：组质粒pcDNA3．1一IL一18一HSVNP6100斗l(1mg／m1)。连续免疫三次，每次间隔一周，}酋次

4、免疫应用弗式完全佐剂与注射质粒1：1混合，以加强免疫效果。小鼠于免疫完成’后1周眼眶内眦静脉取血，间接ELISA法检测血清IgG、IFN吖及IL一18表达量，免疫完成后4周断颈处死小鼠，取小鼠脾淋巴细胞，MTT法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖率。结果(1)构建的串联重组克隆pcDNA3．1一IL一18．HSVP6、pcDNA3．1一IL一18一HSVNP6、pcDNA3．1-IL一18经双酶切及测序鉴定插入序列正确，经l、只J接免疫荧光、WesternblottingpcDNA3．1．IL．18．P6无论是在体液

5、免疫还是在细胞免疫方面，免疫效果均优于其他实验组，能够较好的诱导体液免疫和细胞免疫应答。结论(1)用串联简并引物PCR法成功构建和表达了重组质粒pcDNA3．1．IL．18．HSVP6、pcDNA3．1-IL一18-HSVNP6和pcDNA3．1-IL-18；(2)体内免疫试验证实本研究构建的串联重组克隆pcDNA3．1．IL．18．P6能有效诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答。关键词HSV-2：gD；模拟抗原表位；IL．18：DNA重组疫苗2CONSTRUCTIONOFTHERECOMBINANTOFHSV-2g

6、DMrNOTOPEANDIL．18DNAVACCINESANDITSINDUCINGIMMUNEI乇ESPONSINMICEPostgraduate：LiuLiMajor：PathogenicBiologyTutor：ProfeSSOrYuAiliariViceprofessorWangYuABSTRACTobjectiveTheP6isamimotopeofHSV-2gDandmaybeasubstituteantigenofgD．Find“ssimilarsequenceofnaturalHSV-2gDfr

7、omgenebank．ToconstructandexpresspcDNA3．1一IL-18一HSVP6、pcDNA3．1-IL-18-HSVNP6andpcDNA3．1一IL-18recombinantDNAvaccinesthenexploretheimmuneresponseinmiceinducedbythem．Methods(1)GenesofP6(NP6)andIL一18weresubclonedintotheeukaryoticexpressionvectorspcDNA3．1(-)respect

8、ively．Afterconfirmedbyenzymedigestionandsequenceanalysis，therecombinantplasmidspcDNA3．1一IL一18-HSVP6、pcDNA-3．1一IL一18一HSVNP6andpcDNA3．1-IL一18weretransformedintoCHOcellsbyLipofectamine2000．111eexpr