多聚泛素UBI4低表达对新生隐球菌生长与毒力的功能影响.pdf

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1、·16·中国真菌学杂志2015年2月第1O卷第1期ChinJMycol，February2015，Vol10，No．1·论著·多聚泛素UBI4低表达对新生隐球菌生长与毒力的功能影响孟云芳1周兆婧1杨雅骊1赵静宇1，2张超1法振宗1桑军军1方伟1廖万清1(1．上海长征医院皮肤病与真菌病研究所全军真菌病重点实验室第二军医大学附属长征医院皮肤科，上海200003；2．上海市皮肤病医院，上海200050)【摘要】目的构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株，检测UB14低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法，扩增含有UBI4基因的片段，将其

2、与含有组蛋白启动子的质粒融合。通过基因枪将重组质粒片段转化入新生隐球菌，应用PCR筛选、DNA序列测序以及实时定量PCR方法对基因重建株进行鉴定与验证。检测多聚泛素UBI4低表达菌株对多种应激耐受力、生长曲线以及对蜡蛾感染的毒力影响。结果成功构建了新生隐球菌多聚泛素UBI4低表达。表型检测结果提示：较之标准株，UBI4低表达株生长速率下降，对高温、H，O，和NO应激以及多种抗真菌药物敏感性显著增强；同时，UBI4下调表达后隐球菌对蜡蛾的毒力显著下调。结论我们的研究初步证实多聚泛素蛋白UBI4对新生隐球菌的生长增殖、应激应答以及感染能力具有重要的调控作用，为后

3、续深入探讨新生隐球菌泛素系统的功能机制奠定基础。【关键词】新生隐球菌；多聚泛素；致病机制；应激应答。【中图分类号】R379．5【文献标识码】A【文章编号】1673．3827(2015)10．0016—06EfectsofpolyubiquitinUBI4downregulationongrowthandpathogenesisofCryptococcusneoformansMENGYun-fang，ZHOUZhao．jing，YANGYa-li，ZHA0Jing-yu，ZHANGChao，FAZhen．zong，SANGJun-jun，FANGWei，LIA

4、OWanqing(1．ShanghaiKeyLaboratoryofMolecularMedicalMycologyandPKeyLaboratoryofFungalDiseases，DepartmentofDermatology，ChangzhengHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200003，China；2．ShanghaiDermatologyHospital，Shanghai200003，China)【Abstract】ObjectiveToconstructCryptococcus~

5、eofo瑚strainwithdownregulatedUBI4expressionandexaminetheeffectsofUBI4downregulationongrowthandpathogenesisofC．neoformans．MethodsUBI4DNAfragmentwasamplifiedandinfusedintolinearplasmidpCH20containinghistonepromoter．ThefusedplasmidwasthentransformedintoC．neoformansthroughgenegun．Thepos

6、itivetransformantswerescreenedbydiagnosticPCRandDNAsequencing．VariousphenotypeofC．neoformansreconstitutedstrainH99H。4wereexamined．ResultsCryptococcus~eofor／／／,a／／~strainwithlowexpressionofUBI4wereconstructedandphenotypicas—saysdemonstratedthatdown-regulatedUBI4leadtoslowergrowthrat

7、eandenhancedsusceptibilitytovariousstressessuchasH202，NOandantifungalagentsinC．neofor／T／ztns．Moreover，C．，Q埘0withdown-regulatedUBI4wasalsoattenuateddramaticallyinwaxmothinfectionmode1．ConclusionOurstudysuggestedthatpolyubiquitinUBI4playedacriticalroleincellproliferation，stressre—spo

8、nseandpathogenesisinC．／7~o