hog1p基因对新生隐球菌不同变种毒力影响初步研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。靴敝储雠。够吣辩醐㈨州月／；日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、

2、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：熏幼啁签字日期：为I；年6月弓日新签名：’厂别每签字日期：2t，侈年9月夕日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00000⋯⋯⋯2中英文缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4第一部分、新生隐球菌hoglp基因的克隆、敲除、重建及表达载体的构建前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

3、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5甘U青．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．······································-··-··············材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．6结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

4、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16第二部分、Hoglp基因对新生隐球菌毒力的影响-毒力因子和动物模型研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l9结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

5、．．．25讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4l全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．45发表文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54Hoglp基因对新生隐球菌不同变种毒力影响的初步研究摘要新生隐球菌是一种在全球范围分布的致病真菌病原体。大部分病例报道感染菌株主要以新生隐球菌新生变种为主，新生隐球菌格特变种(又叫格特隐球菌)次之，但近年来格特隐球菌致病报道有逐渐增多的趋势。作为一种重要的病原真菌，新生隐球菌多感染免疫功能低下的患者。在我国，隐球菌病还是以非AIDS人群为主，但伴发于AIDS的病例报道也在逐年增多。目前研究比较多的新生隐球菌的致病因子包括37℃生长、黑素、荚膜、胞外蛋白酶等，然而我们对新生隐球菌的具体致病机制的了解仍

7、然有限。新生隐球菌要侵入宿主并在宿主中生存和繁殖必须要适应宿主环境的高渗压力。在所有致病真菌中，MAPK通路的致病机制已经在白念珠菌中得到最详细的描述，可能是由于其介导白念珠菌感染中关键的形态学变化：酵母相向菌丝相的转换。近来，越来越多的证据表明，新生隐球菌的MAPK通路与酿酒酵母菌和白念珠菌的MAPK通路相似，但同时具备自身的特点。因此我们推测MAPK通路中的h091蛋白也可能在新生隐球菌的感染致病中扮演了重要角色。目前几乎所用HOG．MAPK通路的研究都集中于新生隐球菌血清A型菌株，而本实验我们将主要通过对hoglp

8、的敲除与回复，探索其在格特隐球菌中毒力调控中的作用，并尝试找出该基因在新生隐球菌血清A型和B型菌株毒力调控中的差异。实验中，我们分别敲除新生隐球菌比利时标准株(BLS71，血清A型)和临床分离株(CZ2012，血清B型)的hoglp基因构建缺陷株，再将hoglp基因重新整合到缺陷株中获得重建株。然后比较原始株、缺陷株