htra基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究(1)

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1、HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究(1)作者：黄远帅，许颂霄，朱旦，阳强，刘明芳，陈淑惠，张雪梅，尹一兵　　【关键词】肺炎链球菌；毒力因子；密度感应系统；HtrA基因　　comEffectofHtrAgenedeletiononvirulenceofStreptococcuspneumoniae　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofHtrAgenedeletiononthevirulenceofStreptococcuspneumoniae.METHODS:Htr

2、Adeficientstrainwasconstructedbyinsertion,replicationandinactivation,andidentifiedbyPCR.RelativequantitativeRTPCRwasusedtomeasuretheexpressionlevelsofvirulentfactorsandstudythevirulencechangebymicevirulenceexperiments.RESULTS:TheexpressionofvirulentfactorsinH

3、trAdeficientstrainwaslowerthanthatofthewidetype.TransformationcapabilityofHtrAdeficientstrainobviouslydecreased.Micevirulenceexperimentsshowedthemedianlethaltimeofthewidetypewas22h,whilethatofHtrAmutantwas8d.TheeliminationofHtrAmutantinmicebloodwasfasterthant

4、hatofthewidetype.CONCLUSION:ThedeficiencyofHtrAgenedecreasestheexpressionofvirulentgenesandthetransformationcapability,whichfinallyreducedthebacterialvirulence.　　【Keywords】Streptococcuspneumoniae;virulencefactor;quorumsensing;HtrAgene　　【摘要】目的：HtrA基因可编码肺炎链球菌的一

5、种重要蛋白酶，本文目的是探索HtrA基因缺陷对细菌毒力的影响.方法：用插入复制失活的方式使HtrA基因缺失，通过RTPCR分析毒力因子表达，并通过动物试验观察HtrA基因缺陷株毒力改变情况.结果：RTPCR显示HtrA缺陷株毒力因子表达低于野毒株，两组比较P　　【关键词】肺炎链球菌；毒力因子；密度感应系统；HtrA基因　　　　0引言　　肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae,）是世界范围内引起感染和死亡的重要病原菌之一，是引起肺炎、脑膜炎和中耳炎最常见的病原菌［1］.目前广泛使用的23价肺炎链

6、球菌多糖疫苗免疫原性弱，对老人、幼儿和免疫缺陷疾病患者预防保护效果较差［2］.以破伤风和白喉类毒素作载体的11价结合疫苗仅对2岁以下的婴幼儿有较好的免疫原性［3］.最新研制的溶血素等蛋白类疫苗也只是处于早期临床试验阶段［4-5］.要彻底解决感染的防治关键在于进一步阐明肺炎链球菌致病的分子机制.　　HtrA是的一种热休克诱导的丝氨酸蛋白酶，又叫做DegP或DO蛋白酶［6］.HtrA同时具有一般的分子伴侣功能和蛋白水解活性，环境温度升高时其蛋白酶活性变得明显［7］.目前，已经在多种生物中发现了HtrA的相似体，比如细

7、菌、酵母、植物［8］和人类［9］.在这些生物中HtrA的作用大多表现为帮助它们逃避高氧浓度、高温和高渗等环境变化.HtrA存在于多种革兰氏阴性和阳性细菌中，1998年Gasc等［10］于中首次发现HtrA，并被CiaRH双成分系统调控［11］.HtrA在一次使用信号标签诱变技术（signaturetaggedmutagenesis）的筛选中被认为是的毒力因子［12］.XX年Sebert等［13］通过的幼鼠感染模型进行转录谱基因芯片筛选发现，HtrA可能参与于鼻咽部的定植.但HtrA做为的毒力因子的具体机制目前尚不

8、清楚.　　为深入探讨HtrA作用机制，我们拟构建HtrA基因的缺陷株，研究缺陷株毒力的变化，并从毒力基因的表达、于小鼠体内存活情况和转化能力改变3方面来分析HtrA在毒力中的作用.　　　　1材料和方法　　材料　　血清TIGR4型购自美国标准菌库（ATCC），细菌经鉴定合格：Optochin试验阴性，胆汁溶菌试验阳性，血培养呈光滑、半透明、扁平小菌落伴草绿色α溶血环.培养用