医学毕业论文htra基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究

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1、HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研宄姓名：2014年6月25日HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研宄作者：黄远帅，许颂霄，朱旦，阳强，刘明芳，陈淑惠，张雪梅，尹一兵【关键词】肺炎链球菌；毒力因子；密度感应系统；HtrA基因comEffectofHtrAgenedeletiononvirulenceofStreptococcuspneumoniae[Abstract]AIM:ToinvestigatetheeffectofHtrAgenedeletiononthevirulenceofStreptococcuspneumoniae.METHODS:HtrAdef

2、icientstrainwasconstructedbyinsertion，replicationandinactivation,andidentifiedbyPCR.RelativequantitativeRTPCRwasusedtomeasuretheexpressionlevelsofvirulentfactorsandstudythevirulencechangebymicevirulenceexperiments.RESULTS:TheexpressionofvirulentfactorsinHtrAdeficientstrainwaslowerthantha

3、tofthewidetype(P<0.05).TransformationcapabilityofHtrAdeficientstrainobviouslydecreased.Micevirulenceexperimentsshowedthemedianlethaltimeofthewidetypewas22h，whilethatofHtrAmutantwas8d(P<0.01).TheeliminationofHtrAmutantinmicebloodwasfasterthanthatofthewidetype.CONCLUSION:ThedeficiencyofHtr

4、Agenedecreasestheexpressionofvirulentgenesandthetransformationcapability，whichfinallyreducedthebacterialvirulence.【Keywords】Streptococcuspneumoniae;virulencefactor;quorumsensing;HtrAgene【摘要】目的：HtrA基因可编码肺炎链球菌的一种重要蛋白酶，本文目的是探索HtrA基因缺陷对细菌毒力的影响.方法：用插入复制失活的方式使HtrA基因缺失，通过RTPCR分析毒力因子表达，并通过动物试验观察

5、HtrA基因缺陷株毒力改变情况.结果：RTPCR显示HtrA缺陷株毒力因子表达低于野毒株，W组比较P0.05;转化试验发现缺陷菌株转化力下降；小鼠毒力试验表明野毒株半数致死时间22h,而缺陷株半数致死时间8d，P0.01,有显著性差异；缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野毒株.结论:HtrA基因缺陷使肺炎链球菌多种毒力因子表达减弱，自然转化能力下降，毒力降低.【关键词】肺炎链球菌；毒力因子；密度感应系统；HtrA基因0引言肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)是世界范围内引起感炎和死亡的重要病原菌之一，是引起肺炎、脑膜炎和中耳炎最常见的

6、病原菌［1］.目前广泛使用的23价肺炎链球菌多糖疫苗免疫原性弱，对老人、幼儿和免疫缺陷疾病患荠预防保护效果较差［2］.以破伤风和白喉类毒素作载体的n价S.pn结合疫苗仅对2岁以K的婴幼儿有较好的免疫原性［3］.最新研制的S.pn溶血素等蛋白类疫茁也只是处于早期临床试验阶段［4-5］.要彻底解决S.pn感染的防治关键在于进一步阐明肺炎链球菌致病的分子机制.HtrA(hightemperaturerequirementA)是S.pn的一种热休克诱导的纹氨酸蛋白酶，又叫做DegP或DO蛋白酶［6］.HtrA同时具有一般的分子伴侣功能和蛋白水解活性，环境温度升高时其蛋白酶活性变

7、得明显［7］.0前，已经在多种生物中发现了HtrA的相似体，比如细菌、酵母、植物［8］和人类［9］.在这些生物中HtrA的作用大多表现为帮助它们逃避高氧浓度、高温和高渗等环境变化.HtrA存在于多种革兰氏阴性和阳性细菌中，1998年Gasc等［10］于S.pn中首次发现HtrA,并被CiaRH双成分系统(twocomponentsystems,TCS)调控［11］.HtrA在一次使用信号标签诱变技术(signaturetaggedmutagenesis)的締选中被认为是S.pn的毒力因子［12］.2002年Sebert等［13］通过S.p