医学毕业论文licd2基因缺陷导致肺炎链球菌毒力下降

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1、licD2基因缺陷导致肺炎链球菌毒力下降姓名：2014年6月25日licD2基因缺陷导致肺炎链球菌毒力下降作者：蓝锴，单幼兰，袁军，孟江萍，张雪梅，尹一兵【关键词】缺陷DeletionoflicD2geneleadstoreducedvirulenceofStreptococcuspneumoniae【Abstract】AIM:ToassesstheroleoflicD2geneinthevirulenceofStreptococcuspneumoniae.METHODS:IicD2deficientstrai

2、nwasconstructedandidentifiedbyPCR.RelativequantitativeRTPCRwasappliedtomeasuretheexpressionlevelsofvirulentfactorsandthevirulencewasstudiedbymicesurvivaltest.RESULTS:TheexpressionofvirulentfactorsinlicD2deficientstrainwaslowerthanthatofwidetypestrain(P0.05).

3、ThetransformationcapabilityoflicD2deficientdecreasedobviously，evencompletelylost.Micevirulenceexperimentsshowedthatthesurvivaltimeofwidetypestrainwaslessthan1d，whilethatoflicD2mutationwasmorethan2weeks(P0.001).TheeliminationspeedoflicD2mutationinmicebloodwas

4、fasterthanthatofthewidetype.CONCLUSION:ThedeficiencyoflicD2geneleadstodecreasedtransformationcapabilityandtheexpressionofvirulentgenes，thusmarkedlyreducingthebacterialvirulence.【Keywords】Streptococcuspneumoniae;virulence;reversetranscriptasepolymerasechainre

5、action【摘要】目的：licD2是掌控肺炎链球菌生长所需物质胆碱代谢最重要的基因.本研宄探索licD2基因的缺陷是否影响细菌毒力.方法：采用插入复制失活的方法缺陷licD2基因，通过相对定量RTPCR分析其毒力因子表达情况，并利用动物体内试验观察licD2基因缺陷菌株毒力改变.结果：RTPCR显示licD2缺陷菌株毒力因子表达低于野生菌，两组比较P<0.05;转化试验发现缺陷菌株转化力下降甚至消失；小鼠毒力试验结果野生菌株半数致死吋间<1d，而缺陷菌株半数致死时间为14d，P0.001,差异有显著性；缺陷菌

6、在小鼠体内被清除速度也显著快于野生菌.结论：结果提示licD2基因的缺陷使自然转化力下降，多种毒力因子表达减弱，细菌毒力降低.【关键词】链球菌，肺炎；毒力；逆转录聚合酶链反应0引言目前应用最广泛的23价肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae，S.pn)多糖疫苗，虽然效果较好，但是该疫苗不是蛋白类疫苗、免疫原性较弱，对免疫力低下的人群如老年人、幼儿等预防效果较差[1].最新研制出以破伤风和白喉类毒素作载体的11价S.pn结合疫苗对婴幼儿有很好的免疫原性，但也仅仅限于2岁以下的幼儿[2].因此要

7、彻底解决S.pn感染的防治，仍需深入理解肺炎链球菌致病的分子机制.胆碱作为S.pn所需的生长因子，在链球菌细胞分裂、转化和自溶等生物学特性中有着不可替代的作用.链球菌表面的磷脂酰胆碱可直接与宿主细胞表面作用，从而促进黏附和侵袭[3].磷脂酰胆碱还是大量内皮和上皮细胞表面血小板活化因子受体(plateletactivatingfactorreceptor,PAFR)的黏附配体，S.pn利用胆碱与此受体结合后对宿主细胞的黏附和侵袭会明显增加[4].磯脂酰胆碱还是将胆碱结合蛋白(cholinebindingprote

8、ins,CBPs)这一火类毒力因子家族锚定于细菌表面不可缺少的“锚”[5].近来发现细胞表面磷脂酰胆碱抗原决定簇的表达需要licl位点，含有4个基因，即：licA,licB，licC和licD.在众多的基因位点中，仅有licD2缺陷后S.pn的多种生物学显型，如胆碱摄取能力、转化力、青霉素诱导自溶等才发生显著变化[6]，但具体的机制尚不清楚.我们拟构建licD2基因的缺陷株，研究该基因