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1、HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究作者:黄远帅,许颂霄,朱旦,阳强,刘明芳,陈淑惠,张雪梅,尹一兵【关键词】肺炎链球菌;毒力因子;密度感应系统;HtrA基因comEffectofHtrAgenedeletiononvirulenceofStreptococcuspneumoniae【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofHtrAgenedeletiononthevirulenceofStreptococcuspneumoni舡ae.METHODS:HtrAdef濮icientstrainwascon嚅structedbyinsertio橙n,
2、replicationandin芹activation,andiden箱tifiedbyPCR.RelativequantitativeRTPC询Rwasusedtomeasuret飞heexpressionlevels尝ofvirulentfactorsa髫ndstudythevirulencechangebymicevirul跻enceexperiments.RE蝙SULTS:Theexpressio洒nofvirulentfactors珥inHtrAdeficientstr舞ainwaslowerthantha时tofthewidetype.Tra※nsformationcap
3、abil煊16/16ityofHtrAdeficient严strainobviouslydec躞reased.Micevirulen柰ceexperimentsshowe佑dthemedianlethalti房meofthewidetypewas务22h,whilethatofHtr篥Amutantwas8d.Theel钠iminationofHtrAmut着antinmicebloodwasf叁asterthanthatofthe性widetype.CONCLUSIO枢N:ThedeficiencyofH桉trAgenedecreasesth薯eexpressionofvirul怆en
4、tgenesandthetran霭sformationcapabili嫖ty,whichfinallyred⌒ucedthebacterialvi褓rulence.【Keywords】Streptococcuspneumoniae;virulencef蒽actor;quorumsensin狠g;HtrAgene【摘要】目的谶:HtrA基因可编码肺炎链球菌的一种敖重要蛋白酶,本文目的是探索HtrA基咚因缺陷对细菌毒力的影响.方法:用插入岸复制失活的方式使HtrA基因缺失,通胶过RTPCR分析毒力因子表达,并通过蜴动物试验观察HtrA基因缺陷株毒力改算变情况.结果:RTPCR显示HtrA
5、欺缺陷株毒力因子表达低于野毒株,两组比关较P【关键词】肺炎链球菌;毒力因子;媲密度感应系统;HtrA基因16/160引言魉肺炎链球菌是世界范围内引起感染和莲死亡的重要病原菌之一,是引起肺炎、脑珠膜炎和中耳炎最常见的病原菌[1].目语前广泛使用的23价肺炎链球菌多糖疫苗免疫原性弱,对老人、幼儿和免疫缺陷疾宵病患者预防保护效果较差[2].以破伤菅风和白喉类毒素作载体的11价结合疫苗锏仅对2岁以下的婴幼儿有较好的免疫原性孪[3].最新研制的溶血素等蛋白类疫苗涧也只是处于早期临床试验阶段[4-5]狰.要彻底解决感染的防治关键在于进一步阐明肺炎链球菌致病的分子机制.H柳trA是的一种热休克诱导
6、的丝氨酸蛋白酾酶,又叫做DegP或DO蛋白酶[6].HtrA同时具有一般的分子伴侣功能坫和蛋白水解活性,环境温度升高时其蛋白酶活性变得明显[7].目前,已经在多憾种生物中发现了HtrA的相似体,比如锍细菌、酵母、植物[8]和人类[9].V在这些生物中HtrA的作用大多表现为馥帮助它们逃避高氧浓度、高温和高渗等环刷境变化.HtrA存在于多种革兰氏阴性己和阳性细菌中,1998年Gasc等[10]于中首次发现HtrA,并被Ci记aRH双成分系统调控[11].Htr┸A在一次使用信号标签诱变技术的筛选中迦被认为是的毒力因子[12].2002垮年Sebert等[13]通过的幼鼠感⒈16/16
7、染模型进行转录谱基因芯片筛选发现,HΗtrA可能参与于鼻咽部的定植.但Ht萝rA做为的毒力因子的具体机制目前尚不清楚.为深入探讨HtrA作用机制,我们拟构建HtrA基因的缺陷株,研羸究缺陷株毒力的变化,并从毒力基因的表掎达、于小鼠体内存活情况和转化能力改变ⅱ3方面来分析HtrA在毒力中的作用.1材料和方法材料血清TIG稣R4型购自美国标准菌库,细菌经鉴定合锭格:Optochin试验阴性,胆汁溶偏菌试验阳性,血培养呈光滑、半透明、
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