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《四嗪二甲酰胺体外诱导nb4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究作者:周永列,吕亚萍,胡惟孝,邱莲女,王文松,吴建国,刘建栋【摘要】为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式维甲酸作阳性药物对照,观察ZGDHu-1对NB4细胞增殖抑制、凋亡和分化的作用。用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导NB4细胞分化和调亡过程中bcl-2和bax的表达变化,以及P38MAPK和STAT3磷酸化水平,同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZG
2、DHu-1对NB4细胞增殖和活力抑制呈时间和剂量的量效关系,48和72小时的IC50分别为450和200ng/ml。NB4细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;细胞出现典型的形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V/PI标记升高;Hoechst33258荧光染色后见凋亡细胞的特征性改变,这些均证实ZGDHu-1能诱导NB4细胞凋亡。NB4细胞经2-100ng/mlZGDHu-1作用3天后,细胞部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13表达增高。ZGDHu-1作用NB4细胞后,bcl-2表达无变化,但bax
3、表达显著增加,bax/bcl-2的比值升高,磷酸化P38MAPK表达增强,而磷酸化STAT3表达无变化,端粒酶hTERT-mRNA的表达随ZGDHu-1作用的浓度增加而显著下调。结论:ZGDHu-1能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与bax表达上调、P38MAPK活化增强和端粒酶逆转录酶受抑有关。【关键词】四嗪二甲酰胺;NB4细胞株;有丝分裂原激活蛋白激酶;bax/bcl-2;端粒酶逆转录酶;白血病 EffectsofN,N'-Di-(m-Methylphenyi)-3,6-Dimethyl-1,4-Dihydro-1,2,4,5-Tetrazine-1
4、,4-DicarboamideonProliferation,ApoptosisandDifferentiationofNB4LeukemiaCellsInVitro AbstractThepurposeofthisstudy-methylphenyi)-3,6-dimethyl-1,4-dihydro-1,2,4,5-tetrazine-1,4-dicarboamide(ZGDHu-1)onproliferation,differentiationandapoptosisinNB4humanleukemiacelllineanditspossiblemechanism.Dif
5、ferentconcentrationsofZGDHu-1andthedifferenttimeofcultivationinedbycellmorphology,DNAagarosegelelectrophoresis,DNAcontent,Annexin-V/PIandHoechst33258labelingmethod.Theanalysisofcellmorphologicalchange,expressionofCD11b,CD13andNBTreductionedtoevaluatethedifferentiationofNB4cells.Theexpressionso
6、fbcl-2,baxandphosphorylatedp38MAPKorSTAT3etry.APKactivationandinhibitionofhTERT-mRNA. Keyitogen-activatedprotEinkinase;bax/bcl-2;hTERT-mRNA;leukemia 四嗪是一类四氮杂苯化合物,一般都具有良好的生物活性。目前唯一作为药品上市的替莫唑胺(temozolomide)是一种咪唑四嗪类口服抗肿瘤药,属于不对称四嗪类化合物。四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)是一种新颖的对称四嗪化合物,是胡维孝等[1,2]改进了合成方法而设计并合成的经结构多种修饰的
7、3,6-二甲基-1,4二氢-1,2,4,5-四嗪类化合物。经药物构效学筛选,其中ZGDHu-1具有较强的抗肿瘤作用[3],有望成为一种具有自主知识产权的抗癌新药。为了研究ZGDHu-1抗血液肿瘤的作用及其作用途径,我们以急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为模型,体外观察了ZGDHu-1对NB4增殖、分化和凋亡的作用,并探讨其作用的分子机制。 材料和方法 材料 ZGDHu-1由浙江工业大学药学院制药工程研究所合成,系白色片状结晶。用二甲亚砜溶解配制贮存液,浓度为1m