四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株shi 凋亡及其分子机制研究_论文

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1、四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI1凋亡及其分子机制研究作者：周永列，吕亚萍，胡惟孝，邱莲女，王文松，刘建栋，吴建国【摘要】　　本研究探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu1）诱导白血病细胞株SHI1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu1在体外培养SHI1细胞，用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、AnnexinV/PI双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位（ΔΨm），用流式细胞术检测ZGDHu1诱导SHI1细胞凋亡过程中

2、bcl2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RTPCR观察经ZGDHu1作用后SHI1细胞bcl2、bax、p53基因表达改变；同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERTmRNA表达的变化。结果表明：ZGDHu1能诱导SHI1细胞凋亡，呈作用时间和剂量的量效关系，出现典型的细胞形态改变，DNA片段化，亚G1峰检出并显著增加；AnnexinV/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI1细胞经不同浓度的ZGDHu1体外培养后，b

3、cl2基因和蛋白有所下调，但主要是bax基因和蛋白上调，导致bax/bcl2比值明显增高，18/18p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调，均呈剂量依赖性。随ZGDHu1作用浓度的增加，ΔΨm下降，而线粒体膜蛋白表达显著升高，端粒酶hTERTmRNA的表达显著下调。结论：ZGDHu1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl2比值，使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu1诱导细胞凋亡的途径之一，Fas也参与其中，端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。【关键词】四嗪二甲酰胺　细胞

4、株　SHI1　细胞凋亡　线粒体　端粒酶　AbstractTheaimofstudywastoinvestigatethemechanismofN,N′di(mmethylphenyl)3,6dimethyl1,4dihydro1,2,4,5tetrazine1,4dicarboamide(ZGDHu1)inducingapoptosisinSHI1humanleukemiacellline.DifferentconcentrationsofZGDHu1anddiffere

5、nttimesofculturewereusedtotreatSHI1cells;theapoptosisofSHI1cellswasanalyzedbymorphology,DNAagarosegelelectrophoresis,DNAcontentdetection,AnnexinV/PIandHoechst33258labelingmethod,themitochondrialtransmembrancepotential（ΔΨm）weremeasuredbydihydrorhodami

6、n123,andexpressionsofbcl2,bax,Fas,p53andmitochondrialmembraneproteinwereanalyzedby18/18flowcytometry,whilethebcl2,baxandp53genewereanalyzedbyRTPCR.ThetranscriptionallevelofhTERTmRNAwasmeasuredbyrealtimefluorescencequantitativeRTPCR.Theresultsshowe

7、dthatafterexposuretoZGDHu1,SHI1cellswereinducedtoapoptosisinatimeanddoesdependentmanner.SHI1cellapoposiswascomfirmedbytypicalcellmorphology,DNAfragmentation,subG1phase,Hoechst33258andAnnexinⅤ/PIlabelingetc.Theexpressionofbax,bax/bcl2,p53andFasge

8、nesignificantlyincreasedandbcl2slightlydecreased.ZGDHu1couldincreasedtheexpressionofmitochondrialmembraneproteininadosedependentmannerwhileΔΨmreduced.TheexpressionofhTERTmRNAsignificantlydecreased.ItisconcludedthatZGDHu1canu