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《四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株shi1凋亡及其分子机制研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、农村小学小班化识字研究近年来，随着国家计划生育政策的不断完作者：周永列，吕亚萍，胡惟孝，邱莲女，王文松，刘建栋，吴建国【摘要】本研究探讨四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu1在体外培养SHI1细胞，用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析AnnexinV/PI双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rhl23/PI测定线粒体跨膜电位，用流式细胞术检测ZGDHu1诱导SHI1细胞凋亡过程中bcl2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表
2、达变化。用RTPCR观察经ZGDHu1作用后SHI1细胞bcl2、bax、p53基因表达改变；同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERTmRNA表迗的变化。结果表明：ZGDHu1能诱导SHI1细胞凋亡，呈作用时间和剂量的量效关系，出现典型的细胞形态改变，DNA片段化，亚G1峰检出并显著增加；AnnexinV/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI1细胞经不同浓度的ZGDHu1体外培养后，bcl2基因和蛋白有所下调，但主要是bax基因和蛋白上调，导致bax/bcl2比值明显
3、增高，p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调，均呈剂量依赖性。随ZGDHu1作用浓度的增加，AWm下降，而线粒体膜蛋白表迗显著升高，端粒酶hTERTmRNA的表达显著下调。结论：ZGDHu1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl2比值，使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu1诱导细胞凋亡的途径之一，Fas也参与其中，端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。【关键词】四嗪二甲酰胺细胞株SHI1细胞凋亡线粒体端粒酶AbstractTheaimofstudywastoinvestigatethemech
4、anismofN,Nfdi(mmethylphenyl)3,6dimethyl1,4dihydro1,2,4,5tetrazine1,4dicarboamide(ZGDHu1)inducingapoptosisinSHI1humanleukemiacellline.DifferentconcentrationsofZGDHulanddifferenttimesofculturewereusedtotreatSHIlcells;theapoptosisof’SHI1cellswasanalyzedbymorph
5、ology,DNAagarosegelelectrophoresis,DNAcontentdetection,AnnexinV/PlandHoechst332581abelingmethod,themitochondrialtransmembrancepotentialweremeasuredbydihydrorhodaminl23,andexpressionsofbe12,bax,Fas,p53andmitochondrialmembraneprotEinwereanalyzedbyflowcytometr
6、y,whilethebcl2,baxandp53genewereanalyzedbyRTPCR.ThetranscriptionallevelofhTERTmRNAwasmeasuredbyrealtimefluorescencequantitativeRTPCR.TheresultsshowedthatafterexposuretoZGDHu1,SHIlcellswereinducedtoapoptosisinatimeanddoesdependentmanner.SHIlcellapoposiswasco
7、mfirmedbytypicalcellmorphology,DNAfragmentHoechst33258andAnnation,subexinGlphase,/PIlabelingetc.Theexpressionofbax,bax/bcl2,p53andFasgenesignificantlyincreasedandbcl2slightlydecreased.ZGDHulcouldincreasedtheexpressionofmitochondrialmembraneprotEIninadosedep
8、endentmannerwhile△^mreduced.TheexpressionofhTERTmRNAsignificantlydecreased.ItisconcludedthatZGDHulcanupregulatetheexpressionofp5ThemitochondrialpacentofmitochondriaentialmaybeoneoftingapoptosisbyZ3,bax
