利用随机扩增多态性dna技术分析刺五加的遗传多样性

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1、利用随机扩增多态性DNA技术分析刺五加的遗传多样性作者：邢朝斌，劳凤云，吴鹏，李玉彦，沈海龙【摘要】　　目的从DNA水平对收集的4个产地的刺五加进行遗传多样性分析，为更好地开发利用刺五加资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析遗传多样性，UPGMA进行聚类分析。结果10个随机引物扩增得到72条片段，多态性位点比率为88.89％。不同产地间的遗传相似系数在0.4693～0.7851之间，均值为0.6293，同一产地不同居群间的遗传相似系数在0.5630～0.9542之间，均值为0.7644。不同产地刺五加之间的遗传多样性高于同一产地不同居群的个体，其

2、中产地穆棱的刺五加与产地和龙、本溪、尚志之间的相似性较低，单成一支。产地之间的相似性与地理距离呈不完全相关性。结论刺五加种群内部具有较高的遗传多样性，利用RAPD技术分析刺五加的遗传多样性是可行的。【关键词】刺五加遗传多样性扩增多态性DNA　　Abstract：ObjectiveInordertodevelopandutilizetheresourceofEleutherococcussenticosus,thegeicdiversityofEleutherococcussenticosusfromfourhabitatsilarity,thenclusterana

3、lysisethod.ResultsTenrandomprimersgenerated72bands(rateofpolymorphicbandsilarityindexamongdifferenthabitatseanvalueilarityindexamongdifferentpopulationsofEleutherococcussenticosusfromthesamehabitateanvaluedifferenthabitatsdifferentpopulationsgroehabitatandthesimilarityofEleutherococcus

4、senticosusfromMulingseparatedotherhabitatsfromHelong,BenxiandShangzhi.TheresultsalsoshoilarityamonghabitatsentdifferenthabitatsbyRAPD.　　Key），并进行日常管理与维护。表1植物材料来源（略）　　1.2总DNA的提取利用Tiangen公司植物基因组DNA提取试剂盒提取新鲜叶片的基因组DNA，将准备好的DNA溶于适量的TE缓冲液，用分光光度法测定DNA的浓度和纯度，并将其调整为20μg/μl。　　1.3RAPD产物及检测从40个RAPD

5、随机引物中选取了10个多态性高、重复性好的引物(见表2)，在4个产地10个居群间进行PCR扩增。反应体系如下：25μl体系中包括模板DNA100ng，引物100ng，Taq酶1U，含(NH4)2SO4的10×buffer2.5μl［750mmol/LTris-HCl（pH8.8），200mmol/L(NH4)2SO4，0.1%Tmol/L的MgCl22.5μl，在PTC-100TMPCR仪上进行，程序如下：94℃预变性2min，然后进行以下40个循环：94℃30s，40℃30s，72℃1min，最后72℃延伸5min。反应产物在1.5％琼脂糖胶上检测，电压4V/cm

6、，电泳50min，用BIO-RADGelDoc2000凝胶成像系统记录拍照。用λDNAHindⅢ作分子量对照。表2所用引物及扩增结果（略）　　1.4数据分析利用CrossChecker软件，按琼脂糖凝胶同一位置上DNA电泳条带的有无进行统计，有带的标记为“1”，无带的标记为“0”，获得1、0数据矩阵。应用POPGENE32软件进行UPGMA（Pairgroupmethodusingarithmetic）聚类分析。　　2结果　　2.1刺五加遗传多样性分析结果从40个随机引物（10碱基的寡核苷酸）中筛选出的10个能得到清晰扩增谱带且产生多态性的随机引物进行PCR扩增。共

7、扩增出72个可区分的位点，主要集中在200～2000bp之间，其中64个表现出多态性，多态性比例高达88.89％，平均每个引物产生7.2个位点，其中多态性位点6.4个。4个产地刺五加的多态性位点比例大小依次为：尚志>和龙>本溪>穆棱（见表3）。扩增结果见图1。　　由NEi指数估算的基因多样性结果与多态性位点比例大小顺序相同（见表3）。由POPGENE32算出的总居群基因多样度（Ht）、居群内基因多样度（Hs）和基因分化系数（Gst）在4个产地10居群上分别为：0.4529，0.1794，0.6039；在产地和龙7个居群上分别为：0.3594，0