六味地黄丸对自杀基因系统杀伤肝癌细胞增效作用的量效关系

《六味地黄丸对自杀基因系统杀伤肝癌细胞增效作用的量效关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、六味地黄丸对自杀基因系统杀伤肝癌细胞增效作用的量效关系作者：杜标炎，张爱娟，谭宇蕙，易华，吴映雅，郭玉荣【摘要】【目的】观测六味地黄丸含药血清对自杀基因HSVtk/GCV系统杀伤大鼠肝癌CBRH7919细胞的增效作用，探讨建立自杀基因联合中药方药的肿瘤基因治疗联合方案的可行性。【方法】构建HSVtk/GCV自杀基因治疗系统，并确定丙氧鸟苷（GCV）的工作浓度（392μmol/L）;制备SD大鼠4d和8d六味地黄丸（剂量为32g·kg-1·d-1）灌胃含药血清和生理盐水灌胃空白血清；用大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk-或tk+与tk-1∶9比例混合细胞按

2、3×103个/孔铺96孔板，分为空白血清组、GCV加空白血清组、10%tk+/GCV加空白血清组、含药血清组、GCV加含药血清组及10%tk+/GCV联合含药血清组；含药血清又再分为低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6个复孔，用完全培养基培养24h后，各组分别加入相应空白血清或含药血清，孵育12h，加入终浓度392μmol/L的GCV，培养60h，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活性，Q值法分析自杀基因系统与含药血清联合的相互作用是否具有协同性。【结果】空白血清组、含药血清组、GCV加空白血清组、GCV加含药血清组细胞均未显示明显的细胞毒性。10%tk

3、+/GCV加空白血清组及10%tk+/GCV联合不同浓度的含药血清组均具有显著杀伤作用（与空白血清组比较，Ｐ＜００５），联合组存活率显著低于10%tk+/GCV加空白血清组（Ｐ＜００５）；含药血清中剂量和高剂量组的联合作用具有协同性（Q＞11５），且有浓度依赖性。给药4d血清和给药8d血清结果无显著性差异（P＞005）。【结论】六味地黄丸含药血清对自杀基因系统10%tk+/GCV杀伤大鼠肝癌CBRH7919细胞具有协同增效作用，且有一定的量效关系。【关键词】六味地黄丸/药理学；肝肿瘤/中西医结合疗法；基因治疗；肿瘤细胞，培养自杀基因疗法由于存在旁杀伤效

4、应的独特机制已成为恶性肿瘤基因治疗的研究热点和最有应用前景的肿瘤基因治疗方法，目前已在临床病人及实验动物中广泛用于恶性肿瘤试验性治疗，并已观察到较好的效果［1-4］。但体内自杀基因治疗仍存在载体转染效率低、靶向性不够、治疗载体的毒副作用等问题，严重制约了其临床应用。进一步提高疗效和减少毒副作用是研究热点之一，联合治疗则能在一定程度上达到上述目的［5］。中医药是一个伟大宝库，许多中药方药具有肯定的药理效应［6-8］，联合中医药也可能是一种可行的方案。我们已有的初步研究结果表明［9-10］，自杀基因治疗联合补肾方药六味地黄丸在体内和体外均能起到协同增效的作用。本研

5、究拟在细胞水平上对其量效关系作进一步地论证，现将结果报道如下。1材料和方法11主要试剂与仪器RPMI1640为Gibco公司产品；新生牛血清为TBD公司产品；四甲基偶氮唑盐（MTT）、丙氧鸟苷（Ganciclovir,GCV）、二甲基亚砜（DMSO）均为美国Sigma公司产品；细胞培养瓶、培养板、冻存管、滤膜等均为美国Corning公司或丹麦MUNC公司产品；BNA3210型CO2培养箱（日本ESPEC）；5TT法测定细胞对GCV的敏感性，确定GCV的工作浓度为392μmol/L。15六味地黄丸含药血清和空白血清的制备及血清对细胞生长的影响［10］1

6、6只SD大鼠随机分为2组，空白血清组灌胃生理盐水，六味地黄丸含药血清组灌胃六味地黄丸（32g·kg-1·d-1），制备4d和8d血清，-70℃冰箱保存备用。观测空白血清和含药血清对细胞生长的影响，结果表明血清能在一定程度上促进细胞增殖，但当血清浓度高于体积分数20%时细胞形态出现变化，故实验时采用对细胞生长影响较小的体积分数10%以下的血清浓度。16自杀基因系统联合六味地黄丸含药血清对肝癌细胞的杀伤效应将大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk+和CBRH7919/tk-按1∶9的细胞数混合，作为自杀基因tk/GCV系统作用的细胞；没有自杀基因系统的实验组，其作用

7、细胞均为tk-细胞，按3×103个/孔铺96孔板，分为空白血清组、GCV加空白血清组、10%tk+/GCV加空白血清组、含药血清组、GCV加含药血清组及10%tk+/GCV联合含药血清组；灌胃8d含药血清又再分为低剂量组（25%含药血清+75%空白血清）、中剂量组（5%含药血清+5%空白血清）和高剂量组（10%含药血清），共设12组，每组6个复孔；灌胃4d含药血清则分为低剂量组（5%含药血清+5%空白血清）和高剂量组（10%含药血清），共设9组，每组6个复孔；血清浓度均为体积分数。用完全培养基培养24h后，加入相应空白血清和含药血清，孵育12h，再加入终浓

8、度392μmol/L的GCV，培养6